A combibest teszt alkalmazása a HIV diagnózisában. Modern módszerek a HIV fertőzés diagnosztizálására Videó: modern enzim immunoassay

A HIV-fertőzés időben történő diagnosztizálása rendkívül fontos intézkedéssé válik, mivel a korábbi kezelés nagymértékben meghatározhatja a betegség további fejlődését és meghosszabbíthatja a beteg életét. Az elmúlt években jelentős előrelépés történt ennek a szörnyű betegségnek a felderítésében: a régi tesztrendszereket fejlettebbekre cserélik, a vizsgálati módszerek hozzáférhetőbbé válnak, pontosságuk jelentősen megnő.

Ebben a cikkben a HIV-fertőzés diagnosztizálásának modern módszereiről fogunk beszélni, amelyeket hasznos tudni a probléma időben történő kezeléséhez és a beteg normális életminőségének fenntartásához.

A HIV diagnosztizálásának módszerei

Oroszországban a HIV-fertőzés diagnosztizálására szabványos eljárást végeznek, amely két szintből áll:

ELISA tesztrendszer (szűrőelemzés);
immunblot (IB).

Más diagnosztikai módszerek is használhatók:

expressz tesztek.

ELISA tesztrendszerek

A diagnózis első szakaszában a HIV-fertőzés kimutatására szűrőtesztet (ELISA) alkalmaznak, amely laboratóriumokban létrehozott HIV-fehérjéken alapul, amelyek megfogják a fertőzésre válaszul a szervezetben termelődő specifikus antitesteket. A tesztrendszer reagenseivel (enzimeivel) való kölcsönhatás után az indikátor színe megváltozik. Ezenkívül ezeket a színváltozásokat speciális berendezéssel dolgozzák fel, amely meghatározza az elvégzett elemzés eredményét.

Az ilyen ELISA-tesztek a HIV-fertőzés bejutását követő néhány héten belül képesek eredményt mutatni. Ez az elemzés nem határozza meg a vírus jelenlétét, hanem kimutatja az ellenanyag termelését. Előfordul, hogy az emberi szervezetben a HIV-ellenes antitestek termelése a fertőzés után 2 héttel kezdődik, de a legtöbb embernél később, 3-6 hét elteltével termelődnek.

Az ELISA-teszteknek négy generációja létezik, különböző érzékenységgel. Az utóbbi években egyre gyakrabban alkalmazzák a III és IV generációs tesztrendszereket, amelyek szintetikus peptideken vagy rekombináns fehérjéken alapulnak, és nagyobb specifitásúak és pontosabbak. Használhatók a HIV-fertőzés diagnosztizálására, a HIV-prevalencia nyomon követésére és a biztonság garantálására az adományozott vér tesztelésekor. A III és IV generációs ELISA tesztrendszerek pontossága 93-99% (az országokban érzékenyebb teszteket is gyártanak Nyugat-Európa – 99%).

Az ELISA teszt elvégzéséhez 5 ml vért veszünk a páciens vénájából. Az utolsó étkezés és az elemzés között legalább 8 órának kell eltelnie (általában reggel, éhgyomorra kell elvégezni). Az ilyen tesztet legkorábban az állítólagos fertőzés után 3 héttel ajánlott elvégezni (például új szexuális partnerrel való védekezés nélküli közösülés után).

Az ELISA teszt eredményei 2-10 nap elteltével érhetők el:

negatív eredmény: HIV-fertőzés hiányát jelzi, és nem igényel szakemberhez való utalást;
álnegatív eredmény: megfigyelhető a fertőzés korai szakaszában (legfeljebb 3 hétig), az AIDS későbbi szakaszában súlyos immunszuppresszióval és nem megfelelő vér-előkészítéssel;
hamis pozitív eredmény: egyes betegségeknél és nem megfelelő vérkészítés esetén is megfigyelhető;
pozitív eredmény: HIV-fertőzést jelez, IB-t igényel és a beteg beutalóját AIDS-központ szakemberéhez.

Miért adhat hamis pozitív eredményt az ELISA teszt?

Az ELISA HIV-teszt hamis pozitív eredménye figyelhető meg nem megfelelő vérfeldolgozás esetén, vagy olyan betegeknél, akiknél a következő állapotok és betegségek:

myeloma multiplex;
az Epstein-Barr vírus által kiváltott fertőző betegségek;
állapot után ;
autoimmun betegség;
a terhesség hátterében;
vakcinázás utáni állapot.

A fent leírt okok miatt a vérben olyan nem specifikus, keresztreagáló antitestek lehetnek jelen, amelyek termelődését nem HIV-fertőzés váltotta ki.

Az utóbbi években jelentősen csökkent a hamis pozitív eredmények gyakorisága a III és IV generációs tesztrendszerek alkalmazása miatt, amelyek érzékenyebb peptidet és rekombináns fehérjéket tartalmaznak (ezeket in vitro géntechnológiával állítják elő). Az ilyen ELISA tesztek alkalmazása után a hamis pozitív eredmények gyakorisága jelentősen csökkent, és körülbelül 0,02-0,5%.

A hamis pozitív eredmény nem jelenti azt, hogy egy személy HIV-fertőzött. Ilyen esetekben a WHO újabb ELISA-tesztet javasol (kötelező IV generáció).

A páciens vérét egy referencia- vagy döntőlaboratóriumba küldik „repeat” jelzéssel, és IV generációs ELISA tesztrendszerrel tesztelik. Ha az új elemzés eredménye negatív, akkor az első eredményt hibásnak (hamis pozitívnak) ismeri fel, és az IB-t nem hajtják végre. Ha az eredmény pozitív vagy kétséges a második teszt során, a betegnek 4-6 héten belül IB-n kell átesnie a HIV-fertőzés megerősítésére vagy cáfolatára.

immunblot

A HIV-fertőzés végleges diagnózisát csak pozitív immunblot (IB) eredmény megszerzése után lehet felállítani. Ennek megvalósításához nitrocellulóz csíkot használnak, amelyen vírusfehérjéket alkalmaznak.

Az IB vérmintavétele vénából történik. Ezután speciális kezelésnek vetik alá, és a szérumában lévő fehérjéket töltésük és molekulatömegük szerint speciális gélben választják el (a manipulációt speciális berendezésen, elektromos tér hatására végzik). A vérszérum gélre nitrocellulóz csíkot helyeznek, és egy speciális kamrában blottolást („blotolást”) végeznek. A csíkot feldolgozzák, és ha a felhasznált anyagok HIV-ellenes antitesteket tartalmaznak, az IB antigén sávokhoz kötődnek, és vonalként jelennek meg.

Az IB akkor tekinthető pozitívnak, ha:

az amerikai CDC-kritériumok szerint - két vagy három sor van a gp41, p24, gp120 / gp160 csíkon;
az amerikai FDA kritériumai szerint - a csíkon két p24, p31 és egy gp41 vagy gp120 / gp160 vonal található.

Az esetek 99,9%-ában a pozitív IB eredmény HIV-fertőzést jelez.

Vonalak hiányában az IB negatív.

A gp160, gp120 és gp41 vonalak azonosításakor az IB kétséges. Ilyen eredmény akkor észlelhető, ha:

onkológiai betegségek;
terhesség;
gyakori vérátömlesztés.

Ilyen esetekben javasolt egy második vizsgálat elvégzése egy másik cég készletének felhasználásával. Ha további IB után az eredmény kétséges marad, akkor hat hónapig tartó követés szükséges (3 havonta IB).

polimeráz láncreakció

A PCR teszt képes kimutatni a vírus RNS-ét. Érzékenysége meglehetősen magas, és lehetővé teszi a HIV-fertőzés kimutatását már a fertőzés után 10 nappal. Egyes esetekben a PCR téves pozitív eredményt adhat, mert nagy érzékenysége más fertőzések ellenanyagaira is reagálhat.

Ez a diagnosztikai technika drága, speciális felszerelést és magasan képzett szakembereket igényel. Ezek az okok nem teszik lehetővé a populáció tömeges tesztelése során.

A PCR-t ilyen esetekben alkalmazzák:

a HIV kimutatására olyan újszülötteknél, akik HIV-fertőzött anyától születtek;
HIV kimutatására "ablakidőszakban" vagy kétes IB esetén;
a HIV koncentrációjának szabályozása a vérben;
donorvér vizsgálatához.

Csak a PCR-teszttel nem diagnosztizálják a HIV-t, hanem úgy végzik el kiegészítő módszer diagnosztika a viták megoldására.

Expressz módszerek

A HIV-diagnosztika egyik újítása a gyorstesztek lettek, amelyek eredménye 10-15 perc alatt értékelhető. A leghatékonyabb és legpontosabb eredményeket a kapilláris áramlás elvén alapuló immunkromatográfiás tesztek adják. Ezek speciális csíkok, amelyekre vért vagy más vizsgálati folyadékot (nyál, vizelet) visznek fel. HIV-ellenes antitestek jelenlétében 10-15 perc elteltével színes és kontrollcsík jelenik meg a teszten - pozitív eredmény. Ha az eredmény negatív, csak a kontrollvonal jelenik meg.

Az ELISA tesztekhez hasonlóan a gyorstesztek eredményeit IB analízissel kell megerősíteni. Csak ezt követően lehet diagnosztizálni a HIV-fertőzést.

Vannak expressz készletek otthoni teszteléshez. Az OraSure Technologies1 (USA) teszt az FDA által jóváhagyott, vény nélkül kapható, és a HIV kimutatására használható. A vizsgálat után, pozitív eredmény esetén, a betegnek ajánlott egy speciális központban végzett vizsgálat a diagnózis megerősítésére.

A fennmaradó, otthoni használatra szánt teszteket az FDA még nem hagyta jóvá, és eredményeik nagyon megkérdőjelezhetőek lehetnek.

Annak ellenére, hogy a gyorstesztek pontossága gyengébb, mint az IV-generációs ELISA-tesztek, széles körben használják a populáció további tesztelésére.

HIV-fertőzés vizsgálatát bármely poliklinikán, a Központi Regionális Kórházban vagy az AIDS-re szakosodott központokban végezheti. Oroszország területén teljesen bizalmasan vagy névtelenül tartják őket. Minden beteg orvosi vagy pszichológiai tanácsot kaphat az elemzés előtt vagy után. A HIV-tesztekért csak a kereskedelmi egészségügyi intézményekben kell fizetni, az állami klinikákon és kórházakban pedig ingyenesen végzik el.

Ha többet szeretne megtudni arról, hogyan kaphat el HIV-fertőzést, és milyen mítoszok léteznek a fertőzés lehetőségeivel kapcsolatban, olvassa el

Általános információk a tanulmányról

A HIV (humán immundeficiencia vírus) a retrovírusok családjába tartozó vírus, amely sejteket fertőz immunrendszer humán (CD4, T-helperek). AIDS-et okoz.

A HIV-1 a vírus leggyakoribb típusa, leggyakrabban Oroszországban, az USA-ban, Európában, Japánban és Ausztráliában fordul elő (általában B altípus).

A HIV-2 ritka típus, Nyugat-Afrikában gyakori.

A humán immundeficiencia vírus diagnosztizálására egy kombinált negyedik generációs tesztrendszert alkalmaznak, amely már a vírus vérbe kerülése után 2 héttel képes kimutatni a HIV-fertőzést, míg az első generációs tesztrendszerek ezt csak 6-12 hét múlva. fertőzés után.

Ennek a kombinált HIV-teszt előnye, hogy a HIV-1 p24 elleni antitestek reagensként történő felhasználásának köszönhetően kimutatható a specifikus p24 antigén (vírus kapszid fehérje), amely ezzel a teszttel már a fertőzés után 1-4 héttel kimutatható. vagyis még a szerokonverzió előtt, ami jelentősen csökkenti az "ablakperiódus"-ot.

Ezen túlmenően egy ilyen HIV-teszt kimutatja a HIV-1 és HIV-2 elleni antitesteket a vérben (az antigén-antitest reakció segítségével), amelyek elegendő mennyiségben termelődnek ahhoz, hogy a tesztrendszer meghatározza a pillanattól számított 2-8 hét elteltével. fertőzéstől.

A szerokonverziót követően az antitestek elkezdenek kötődni a p24 antigénhez, ami pozitív HIV antitest tesztet és negatív p24 tesztet eredményez. Egy idő után azonban mind az antitestek, mind az antigén egyidejűleg kimutatható a vérben. A végső szakaszban a HIV-ellenes antitestek AIDS-tesztje negatív eredményt adhat, mivel az antitestek termelődésének mechanizmusa megszakad.

A HIV-fertőzés szakaszai

Az inkubációs periódus vagy a „szeronegatív ablak periódusa” a fertőzés pillanatától a vírus elleni védekező antitestek vérben történő termelődéséig tartó idő, amikor a HIV-ellenanyag-teszt negatív, de a személy már továbbadhatja a vírust más emberek. Ez az időszak 2 héttől 6 hónapig tart.
Akut időszak HIV fertőzésátlagosan a fertőzés után 2-4 héttel jelentkezik, és körülbelül 2-3 hétig tart. Ebben a szakaszban néhány embernél nem specifikus influenzaszerű tünetek alakulhatnak ki a vírus aktív replikációja miatt.
A látens szakasz tünetmentes, de közben fokozatosan csökken az immunitás és megnő a vírus mennyisége a vérben.
Az AIDS (szerzett immunhiányos szindróma) a HIV-fertőzés végső stádiuma, amelyet az immunrendszer súlyos szuppressziója, valamint a kísérő betegségek, agyvelőbántalmak ill. onkológiai betegségek.

Annak ellenére, hogy a HIV-fertőzés gyógyíthatatlan, ma már létezik rendkívül aktív antiretrovirális terápia (ART), amely jelentősen meghosszabbíthatja a HIV-fertőzöttek életét és javíthatja annak minőségét.

Ennek a tesztnek különösen magas a diagnosztikus értéke, ha a HIV-fertőzés röviddel a vizsgálat időpontja előtt (2-4 hét) történt.

Mire használják a kutatást?

Az elemzést arra használják korai diagnózis HIV, amely segít megelőzni a vírus további átvitelét más emberekre, valamint időben elkezdi az antiretrovirális terápiát és a HIV-fertőzés progressziójához hozzájáruló betegségek kezelését.

Mikorra tervezik a vizsgálatot?

Tartós (2-3 hétig tartó) tisztázatlan etiológiájú tünetek esetén: subfebrilis hőmérséklet, hasmenés, éjszakai izzadás, hirtelen fogyás, emelkedett nyirokcsomók.
Ismétlődő herpeszfertőzéssel, vírusos hepatitissel, tüdőgyulladással, tuberkulózissal, toxoplazmózissal.
Ha a beteg szexuális úton terjedő betegségekben szenved (szifilisz, chlamydia, gonorrhoea, genitális herpesz, bakteriális vaginosis).
Ha a beteg védekezés nélküli vaginális, anális vagy orális szexet folytatott több szexuális partnerrel, új partnerrel, vagy olyan partnerrel, akinek HIV-státuszában a beteg nem biztos.
Amikor a beteg vérátömlesztési eljáráson esett át (bár az ilyen fertőzéses esetek gyakorlatilag kizártak, mivel a vért gondosan megvizsgálják a vírusrészecskék jelenlétére, és speciális hőkezelésnek vetik alá).
Ha a beteg nem steril eszközökkel adott be gyógyszert.
Terhesség/terhességtervezés alatt (AZT terhesség alatt, császármetszés a vírusnak a gyermekre való átjutásának elkerülése érdekében a szülőcsatornán való áthaladáskor, és nem szoptatás 30%-ról csökkenti a HIV anyáról gyermekre történő átvitelének kockázatát 1%-ra.
Véletlen injekció fertőzött vért tartalmazó fecskendővel vagy más tárggyal (például orvosi műszerrel) (ilyen esetekben a fertőzés valószínűsége rendkívül alacsony).

A HIV-fertőzést a specifikus megelőzési módszerek hiánya és a terápia elégtelen hatékonysága miatt kontrollálatlan betegségek közé sorolják. Ezért a HIV-fertőzés epidemiológiai helyzetének szabályozására jelenleg elsősorban a szűrődiagnosztikai vizsgálatokat alkalmazzák. A HIV-fertőzés diagnosztizálásának módszerei között a vezető helyet az enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) foglalja el, amely lehetővé teszi a betegség kórokozójának szerológiai markereinek azonosítását a vizsgált egyénekben.

Ez a jelentés a HIV-ellenes antitestek meghatározásának eredményeit mutatja be 40 823 ember vérszérumában, beleértve a betegeket is. terhességi klinikák, poliklinikák, városi kórházak, valamint a veszélyeztetett betegek (kábítószerfüggők, vírusos hepatitis B, C és nemi úton terjedő betegségek) vizsgálatára és kezelésére szakosodott egészségügyi központok. A vizsgálatokat 2005-ben a Szülészeti és Nőgyógyászati Kutatóintézet Immunológiai Laboratóriumában végeztük. ELŐTT. Ott az Orosz Orvostudományi Akadémia munkatársa, aki több mint 15 éves tapasztalattal rendelkezik az ELISA módszerek alkalmazásában különböző fertőző betegségek diagnosztizálására.

A vérszérumminták kezdeti vizsgálatához a CombiBest anti-HIV-1 + 2 tesztrendszert (ZAO Vector-Best, Novoszibirszk) alkalmaztuk, amely a HIV-1 és HIV-1 összes specifikus antitestét detektálja a vizsgált humán mintákban. szérum vagy vérplazma 2 (A, G és M immunglobulinok). Ebben a diagnosztikai készletben a rekombináns HIV-fehérjéket mind a tabletták üregeiben való rögzítésre, mind a torma-peroxidázzal konjugátumként alkalmazzák. A szérumanalízis eredményeit a tesztrendszerre vonatkozó utasítások szerint értékeltük ki: a negatív (HIV-1 és HIV-2 antitesteket nem tartalmazó) vizsgálati mintáknak minősültek, amelyek optikai sűrűsége (OD) ELISA-ban nem haladta meg az ODcrit értéket.

A laboratóriumi szűrés során a 40 823 szérummintából 40 222 (98,5%) negatívnak bizonyult ELISA-ra, és a vizsgált minták közül 601 (1,5%) kezdetben pozitívnak minősült. A 601 szérum mindegyikének másnapi újraelemzése eredményeként (a tabletta két üregében) 440 (73,2%) mintát azonosítottunk pozitívnak és 161 (26,8%) negatívnak. Az Egészségügyi és Szociális Fejlesztési Minisztérium ajánlásának megfelelően 440 szűrés-pozitív szérumot lefagyasztottunk, és további megerősítő vizsgálatok céljából átvittük a 2000. évi Kórház referencialaboratóriumának konzultációs és diagnosztikai helyiségébe. S.P. Botkina. Ezeket a vizsgálatokat ELISA tesztrendszerekkel végezték el „ECOlab-Vironostics HIV 1.2 Ag/Ab” („ECOlab”, Elektrogorsk), „Genscreen Plus” HIV Ag-Ab” (BioRad, USA), valamint immunblot készletek. A megerősítő tesztekben 440 szérum elemzésének eredménye arra a következtetésre jutott, hogy 323 (73,4%) minta pozitív, 102 (23,2%) pedig negatív. 15 vizsgált mintánál (3,4%) meghatározatlan analitikai eredményt kaptunk.

Megjegyzendő, hogy a laboratóriumunkban a CombiBest anti-HIV-1+2 tesztrendszerrel végzett kezdeti tesztelés során a 323 pozitív szérum közül 314-nél (97,2%) 0,900 és 1,780 között volt az OD-érték, és 9 esetben. (2,8%) minták - 0,500-0,900. 102 negatív szérum 52 minta (51%) szűrésével kapott OD-értékek 0,195 és 0,400 között változtak; 40 (39,2%) mintához - 0,401-0,800; 10 (9,8%) minta - több mint 0,800.

Így az elvégzett munka eredményeként bebizonyosodott, hogy a CombiBest anti-HIV-1+2 tesztrendszerrel a vérszérumok elsődleges vizsgálata a HIV-fertőzés szerológiai markereinek jelenlétére rendkívül hatékony. A pozitív szűrési eredményeket a referencialaboratóriumban végzett további vizsgálatok az esetek 73%-ában erősítették meg, és a 40 823 elemzett szérum közül csak 0,25%-ban regisztráltak hamis pozitív eredményt.

Leírás

Készítmény

Javallatok

Az eredmények értelmezése

Leírás

Meghatározás módja Enzim immunoassay (ELISA).

Vizsgált anyag Szérum

Házi látogatás lehetséges

HIV 1. és 2. típusú antitestek és HIV p24 antigén kombinált kimutatása, kvalitatív teszt.

Figyelem. Pozitív és kétséges reakciók esetén az eredmény kiadásának határideje 10 munkanapig meghosszabbítható. A HIV (humán immundeficiencia vírus), amely AIDS-et (szerzett immunhiányos szindrómát) okoz, a retrovírusok családjába tartozik. Emberről emberre fertőzött tűk és fecskendők használatával terjed intravénás kábítószer-használathoz vagy terápiás eljárásokhoz, szexuális érintkezés útján, heteroszexuális és homoszexuális úton egyaránt. A vírus átvitele történhet fertőzött vér és termékeinek transzfúziójával, szerv- vagy magfolyadék adományozásával, egészségügyi dolgozóknál - fertőzött tűvel vagy műszerrel megsérülve. A HIV-fertőzés a fertőzött anyától a gyermekre való átterjedése révén lehetséges (függőleges út), bár a korszerű megelőzési módszerek antiretrovirális terápiával, ha minden ajánlást betartanak, minimálisra csökkenthetik ezt a kockázatot.

A vírus és a sejt kölcsönhatásának folyamata számos szakaszból áll: a vírus kötődése a sejthez, felszabadulása a héjból, behatolás a citoplazmába, DNS szintézis a vírus RNS-ből és a vírus DNS integrációja a sejt genomjába. a gazdasejt. Ezt követően kezdődik a fertőzés látens szakasza. Ebben az állapotban a provirális DNS egy ideig létezhet anélkül, hogy aktivitást mutatna, és anélkül, hogy befolyásolná a gazdasejt létfontosságú aktivitását. Amíg a vírusfehérjék nem expresszálódnak, addig nincs immunválasz a vírusra. A HIV elleni antitestek, amelyek a szervezet immunválaszát jellemzik, a vírus DNS aktiválása és a vírus aktív reprodukciójának kezdete után jelennek meg. A látens időszak időtartama számos tényezőtől függ, beleértve a szervezet egyedi genetikai jellemzőit.

A HIV-ellenes antitestek a fertőzést követő második héttől kezdődően jelenhetnek meg; tartalmuk 2-4 héten belül megnövekszik és hosszú évekig fennmarad. A fertőzöttek 90-95%-ánál a fertőzést követő első három hónapban, 5-9%-ban - három-hat hónapos időszakban, 0,5-1%-ban - később jelentkeznek.

A fertőzés első heteiben, még a vírus elleni antitestek megjelenése előtt (azaz a szerokonverzió előtt) szérum- vagy plazmamintákban kimutatható a HIV antigének jelenléte, beleértve annak p24 kapszid fehérjét is. Később, a szerokonverzió után általában kimutathatatlanná válik.

A negyedik generációs kombinált vizsgálatok, mint például a HIV Ag/Ab Combo teszt (Architect, Abbott), mind a HIV 1-es és 2-es típusú antitesteket, mind a HIV p24 antigént kimutatják, lehetővé téve a fertőzés korai felismerését. Az INVITRO laboratóriumban a HIV-fertőzés kimutatására használt szűrővizsgálat speciális jellemzői közé tartozik a vizsgálat magas specificitása (> 99,5%); A teszt 100%-os érzékenysége a szerokonverziós periódusra jellemző antitestekre, és a teszt érzékenysége a p24 antigénre körülbelül 18 pg/ml.

A HIV laboratóriumi vizsgálatának eljárását szigorúan az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának rendeletei szabályozzák, és magában foglalja a HIV-ellenes antitestek jelenlétének szűrési (szűrési) vizsgálatának szakaszát az enzim immunoassay (ELISA) módszerekkel. , és egy ellenőrző (megerősítő) részletesebb vizsgálat szakasza a városi AIDS központ laboratóriumában. Megjegyzendő, hogy még a legjobb szűrővizsgálati ELISA rendszerek sem garantálják a 100%-os specificitást, vagyis van némi lehetőség nem specifikus, álpozitív eredmények elérésére a páciens vérszérumának jellemzőivel összefüggésben. Ezért előfordulhat, hogy a pozitív szűrési ELISA eredmény nem erősíthető meg a megerősítő tesztekkel, ami után a beteg negatív vagy határozatlan eredményt kap. Ha a megerősítő vizsgálat eredménye határozatlan, a tesztelést dinamikusan meg kell ismételni 2-3 hét múlva.

A HIV-fertőzött anyáktól született gyermekek HIV-fertőzésének laboratóriumi diagnózisának megvannak a maga sajátosságai. A HIV elleni anyai antitestek (IgG osztály) a születéstől számított 18 hónapig keringhetnek a vérükben. A HIV elleni antitestek hiánya újszülötteknél nem jelenti azt, hogy a vírus nem lépte át a placenta gáton. A HIV-fertőzött anyák gyermekeit a születést követő 36 hónapon belül laboratóriumi diagnosztikai vizsgálatnak vetik alá.

Készítmény

Különleges előkészítés nem szükséges. A vérvétel legkorábban az utolsó étkezés után 4 órával javasolt. A kutatásra való felkészüléshez általános ajánlások találhatók. A HIV antigén és antitestek kimutatására szolgáló tesztet célszerű legkorábban az esetleges fertőzés után két héttel elvégezni, negatív eredmény esetén három és hat hét múlva megismételni. Az INVITRO LLC-nél a kutatási kérelmek regisztrációja útlevél vagy azt helyettesítő dokumentum (migrációs kártya, ideiglenes tartózkodási hely szerinti regisztráció, szolgálati igazolvány, útlevélirodai igazolás útlevél elvesztése esetén, regisztrációs kártya) alapján történik. szállodából). A benyújtott dokumentumnak tartalmaznia kell az Orosz Föderáció területén történő ideiglenes vagy állandó regisztrációra vonatkozó információkat és egy fényképet. Útlevél (az azt helyettesítő dokumentum) hiányában a betegnek jogában áll anonim kérelmet benyújtani bioanyag szállítására. Anonim vizsgálattal a kérelemhez és az ügyféltől kapott bioanyagmintához olyan számot rendelünk, amelyet csak a beteg és a rendelést feladó egészségügyi személyzet ismer. ! Az anonim módon végzett vizsgálatok eredményei nem adhatók be kórházi kezelésre, szakmai vizsgálatra, és nem kötöttek ORUIB regisztrációhoz.

Az előjegyzés jelzései

Nyirokcsomók megnagyobbodása több mint két területen.
Leukopénia limfopéniával.
Éjjeli izzadás.
Hirtelen fogyás ismeretlen okból.
Több mint három hétig tartó hasmenés ismeretlen okból.
Ismeretlen okú láz.
Terhesség tervezése.
Preoperatív felkészítés, kórházi kezelés.
A következő fertőzések vagy ezek kombinációinak azonosítása: tuberkulózis, nyilvánvaló toxoplazmózis, gyakran visszatérő herpeszvírus fertőzés, candidiasis belső szervek, visszatérő neuralgia herpes-zoster, mycoplasma, pneumocystis vagy legionella tüdőgyulladás okozta.
Kaposi-szarkóma fiatalon.
Alkalmi szex.

Az eredmények értelmezése

A vizsgálati eredmények értelmezése információkat tartalmaz a kezelőorvos számára, és nem minősül diagnózisnak. Az ebben a részben található információkat nem szabad öndiagnózisra vagy önkezelésre használni. A pontos diagnózist az orvos állítja fel, felhasználva mind ennek a vizsgálatnak az eredményeit, mind a szükséges információkat más forrásokból: anamnézis, egyéb vizsgálatok eredményei stb.

Mértékegységek a Független laboratóriumban INVITRO: kvalitatív teszt. Az eredmények bemutatásának formája: HIV 1 és 2 és p24 antigén elleni antitestek hiányában a válasz „negatív”. A szűrő ELISA tesztben HIV-ellenes antitest vagy antigén kimutatása esetén a szérummintát megerősítő immunoblot módszerrel elemzésre küldik a városi AIDS-központba, amely igazolja a pozitív és határozatlan eredményeket.

Pozitív eredmény:

HIV fertőzés;
hamis pozitív eredmény ismételt vagy további vizsgálatokat igényel*);
a vizsgálat nem tájékoztató jellegű a HIV-fertőzött anyáktól született 18 hónaposnál fiatalabb gyermekek esetében.

*A HIV 1 és 2 antitestek és HIV 1 és 2 antigén (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) szűrővizsgálati rendszerének specificitását a reagens gyártója körülbelül 99,6%-ra becsüli mind az általános populációban, mind a betegek csoportjában. lehetséges interferenciák (HBV, HCV, Rubeola, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. stb. fertőzések, autoimmun patológiák (beleértve rheumatoid arthritis, antinukleáris antitestek jelenléte), terhesség, emelt szint IgG, IgM, monoklonális gammopathia, hemodialízis, többszöri vérátömlesztés).

Az RU 2283497 számú szabadalom tulajdonosai:

A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV), az első típusú O csoport elleni antitestek spektrumának azonosítására szolgáló enzimes immunoassay tesztrendszer, valamint a p24 első típusú humán immundeficiencia vírus elleni antitestek spektrumának azonosítására szolgáló, immunszorbens alapú tesztrendszer gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), a HIV antigén 1 p24 elleni antitestjeit képviselő humán immunhiány vírus antigéneken , és kimutatási reagensek, míg a fenti HIV antigéneket és HIV antitesteket a lemezek különböző üregeiben szorbeálják az enzim immunoassay-hez, a szorpcióhoz pedig 96 lyukú polisztirol összenyomható vagy nem összecsukható lemezeket használnak. A találmány megnövelt érzékenységet, egyszerűsítést, a szubjektivitás kizárását biztosítja az eredmények értékelésében. 1 z.p. f-ly, 10 tab., 1 ill.

A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Felhasználás: a humán immundeficiencia vírus 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén fehérjéi elleni specifikus antitestek minden osztályának differenciált kimutatása.

Lényege: enzim-immunoassay tesztrendszer beszerzése az egyes fehérjék, valamint a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek spektrumának azonosítására vérszérumban (plazmában), immunglobulinokban és vérkészítményekben az azonosítás érdekében a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport elleni antitestek spektruma, HIV 1 p24 antigén kimutatása, valamint a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek pozitív vagy határozatlan szűrési eredményeinek megerősítése.

A TALÁLMÁNY LEÍRÁSA

A HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztikája három területre épül: a) a HIV és összetevőinek kimutatása; b) HIV elleni antitestek kimutatása; c) az immunrendszer változásainak meghatározása. A meglévő laboratóriumi diagnosztikai módszerek közül a szerológiai módszerek a leggyakoribbak - a vírusantigénekkel szembeni antitestek kimutatása.

Az antitestek kimutatására HIV-fertőzésben elsősorban az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) és az immunoblotot (IB) alkalmazzák. Az ELISA a vírus antigének lemezeken történő rögzítésén alapul, amelyek megkötik a páciens antitesteit, és az antigén-antitest komplex kimutatása torma-peroxidázzal konjugált egér monoklonális antitestek felhasználásával történik humán immunglobulin G és M ellen. A módszer meglehetősen specifikus és érzékeny, és lehetővé teszi a vírusspecifikus antitestek kimutatását a betegek 95% -ánál. Az esetek fennmaradó 5%-a a fertőzés korai szakaszában fordul elő, amikor még kevés antitest van a vérszérumban, vagy a betegség végstádiumában, amikor a szervezet már nem képes antitesteket szintetizálni az erős kimerülés miatt. az immunrendszert. Hamis pozitív ELISA eredmények is lehetségesek, főként autoimmun és onkológiai betegségekben, valamint Eshptein-Barr vírus okozta fertőzésekben szenvedő betegeknél. Ebben az esetben a rheumatoid faktor elleni antitestek keresztreakciója lép fel, Epstein-Barr vírus vagy olyan antigéndeterminánsokhoz, amelyek hasonlóak a fő hisztokompatibilitási komplex 1. és 2. osztályú fehérjéihez (HLA-4 és DQW3), és képesek kötődni a HIV antigénekhez. Hamis pozitív eredmények gyakran láthatók terhes nőknél és időseknél. A hemolízis, a lipémia, a szérumok bakteriális szennyeződése is a megbízhatatlan eredmények oka lehet.

E tekintetben számos módszert javasoltak és alkalmaztak az antitest-detektálás eredményeinek specifitásának tesztelésére. Ezen módszerek közül a leggyakrabban alkalmazott reakció az "immunblot" a "Western Blot" módosításában. A módszer lényege a következő: az első szakaszban a HIV fehérjéket molekulatömeg alapján választják el poliakrilamid gélelektroforézissel. Ezt követi az elektroforetikus átvitel a poliakrilamid gélről a nitrocellulóz membrán felületére. Az így átvitt antigéneket a membránon indirekt analízissel detektáljuk: a membránt a vizsgált anyaggal inkubáljuk; a tartalmazott antitestek nitrocellulóz membránra átvitt HIV antigénekhez kötődnek, majd a membráncsíkokat a konjugátummal inkubálják; ha antigén-antitest komplex képződik, a konjugátum hozzátapad, a konjugátumról való lemosás és a szubsztráttal való inkubálás után a nitrocellulóz azon szakaszainak festődése következik be, ahol az antigén-antitest-konjugátum komplex képződése következik be. A rajz példákat mutat pozitív, gyengén pozitív és negatív immunblot eredményekre.

A HIV-1-vel és HIV-2-vel fertőzött személyek szérumában a következő fehérjék (p) és glikoproteinek (gp) elleni antitestek találhatók: A táblázat.

A B. táblázat bemutatja a WHO és az Orosz AIDS Megelőzési és Ellenőrzési Központ által javasolt immunblot eredmények értékelésének kritériumait.

A WHO-kritériumok alapján a szérumok akkor tekinthetők pozitívnak, ha bármely két HIV-1 burokfehérje ellen antitestet mutatnak ki az IB módszerrel. Ha csak az egyik burokfehérjével (gp160, gp120, gp41) van reakció, más fehérjékkel vagy anélkül, akkor az eredmény kétséges. Az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának az AIDS megelőzésével és ellenőrzésével foglalkozó Szövetségi Tudományos és Módszertani Központja szerint lehetséges a szérum pozitívként értelmezni, még akkor is, ha csak egy burokfehérje elleni antitestek vannak jelen.

A p24 antigén elleni antitestek kimutatása jelezheti a szerokonverzió kezdetének időszakát, mivel először az e fehérje elleni antitestek jelennek meg. A gag és pol fehérjékkel végzett pozitív reakciók az env fehérjékkel való reakció nélkül a korai szerokonverzió stádiumát tükrözhetik, valamint HIV-2 fertőzés jelenlétét vagy nem specifikus reakciót jelezhetnek.

Az immunoblot mint szakértői módszer a HIV diagnosztizálására számos jelentős hátránnyal jár:

1. A HIV 1 p24 antigénjének kimutatásának igazolásának lehetetlensége a HIV antigént és antitesteket egyidejűleg meghatározó tesztek alkalmazása esetén, ami miatt nem megfelelő (értelmetlen) a szűrővizsgálatok alkalmazása az antigén és antitestek egyidejű kimutatására HIV-fertőzésre (az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának 292. számú, 2001. július 30-i rendelete: "a donorok vérátömlesztő állomásokon történő vizsgálatához olyan tesztrendszereket kell használni, amelyek mind a HIV-ellenes antigéneket, mind pedig antitesteket kimutatják").

2. Csak az IgG osztályba tartozó antitestek kimutatása. A 3. és 4. generációs tesztekkel (IgG és IgM antitestek kimutatása) lehetetlen teljes mértékben megerősíteni a kapott pozitív eredményeket.

3. A teszteredmény értelmezésének szubjektivitása, különösen "kétes" és "meghatározatlan" eredmények esetén, ill. kezdeti szakaszaiban szerokonverzió (a nitrocellulóz membránokon a kimutatható sávok ezekben az esetekben homályosak, szabad szemmel alig láthatók, és gyakran vannak nézeteltérések, ha különböző emberek értékelik).

4. Az elemzés eredményeinek automatizált kvantitatív kiértékelésének lehetetlensége.

5. Alacsonyabb érzékenység az ELISA-hoz képest.

6. A tárolás törékenysége (a tárolás során a nitrocellulóz membrán csíkjai elhalványulnak, és nem lehet objektív megerősítése a HIV kimutatásának vagy nem észlelésének ellentmondásos esetekben).

7. Nehézségek a reakció és a tárolás során (a nitrocellulóz membráncsíkok nagyon törékenyek és gyakran eltörnek).

8. Az IS készletek magas költsége.

Ismert reagens, amely egy készlet ugyanazon kórokozó elleni antigének és antitestek egyidejű meghatározására, beleértve a HIV-t is (DE 4236189 F1, 1994.04.28.). Olyan tesztrendszert azonban nem tettek közzé, amely lehetővé tenné a HIV-fertőzés különböző szakaszokban történő diagnosztizálását.

A jelen találmány célja egy olyan tesztrendszer előállítása, amellyel a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek szűrési tesztjei pozitív vagy kétséges eredményei megerősíthetők, a HIV egyidejű kimutatására szolgáló tesztek segítségével. antigének és antitestek.

A javasolt technikai megoldást egy enzim-immunoassay tesztrendszer valósítja meg az első és második típusú humán immunhiány vírus (HIV) antitestek spektrumának azonosítására, az első típusú O csoportra, valamint a humán immundeficiencia vírussal szembeni p24 antigén kimutatására. az első típusú p24, azzal jellemezve, hogy a humán immundeficiencia vírus antigénjein alapuló immunszorbenst tartalmaz, amelyek a következők: gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), a HIV 1-es p24 antigén elleni antitestek és kimutatási reagensek, ahol a fenti HIV-antigének és HIV-antitestek a lemezek különböző üregeiben vannak adszorbeálva az enzimes immunológiai vizsgálathoz.

Ezenkívül 96 lyukú polisztirol összenyomható vagy nem összecsukható lemezeket használnak az enzim immunoassay-hez a szorpcióhoz.

A jelen találmánnyal elért technikai eredmény a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek pozitív eredményeinek megerősítésének lehetősége, nagy érzékenység, az eredmények automatizált értelmezésének lehetősége, ami kiküszöböli a fertőzés szubjektivitását. az értékelés, a teszt elvégzésének egyszerűsége, kevesebb, mint a meglévő költség IS készleteknél.

Ez a műszaki megoldás eltér az ismertektől:

1. Használja szilárd fázisú hordozólemezként immunológiai reakciókhoz.

2. A p 24 HIV elleni antitestek és egy sor HIV antigének egyidejű alkalmazása szorbensként.

A találmányt a következő példa szemlélteti.

A kifejlesztett "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" tesztrendszer hatóanyagai a következők:

Immunszorbens - HIV-1 szerkezeti fehérjékhez hasonló rekombináns antigének: gp41 (env HIV-1 és HIV 1 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) és monoklonális a HIV 1(p24) antigén elleni egér antitestek külön adszorbeálva egy polisztirol összenyomható lemez csíkjain.

Immunszorbens felhasználás elkészítéséhez:

1. A HIV-1 gp41 az AHIV 103 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

2. A HIV-1 gp120 az AHIV 109 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

3. HIV-1 p24 - az AHIV 105 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

4. HIV-1 p31 – az AHIV 108 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

5. HIV-2 p36 – az AHIV 106 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

Konjugátum 1, liofilizált vagy folyékony, egér monoklonális antitestek HIV1 p24 antigénnel, biotinnal konjugálva.

1. 2. konjugátum, liofilizált vagy folyékony, a HIV-1 szerkezeti fehérjéihez hasonló rekombináns antigének keveréke: gp41 (env HIV-1 és HIV 1 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1) ); HIV-2: biotinnal konjugált gp36 (env);

2. 3, 4 konjugátumok - liofilizált vagy folyékony - torma-peroxidázzal jelölt sztreptavidin;

Az előtanulmányok során megválasztották a tesztrendszer kialakítását, kidolgozták a komponenseinek elkészítési technológiáját, és optimalizálták az enzim immunoassay lefolytatásának feltételeit.

Amikor az ELISA-t a "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1" tesztrendszerben beállítjuk, 25 μl konjugátum-1-et adunk a lemez lyukaiba a p24 elleni adszorbeált antitestekkel, és az adszorbeált antigéneket tartalmazó lyukak - 25 µl konjugátum-2. A reakcióvázlat az alábbiakban látható. Ezután minden lyukba 25 μl vizsgálati mintát adunk. Ugyanakkor az antigéneket tartalmazó üregekben a szín narancssárgáról rózsaszínre változik, az antitesteket tartalmazó üregben pedig zöldről szürkére. Az elegyet 45 percig 37 °C-on rázógépen (vagy 1 órán át 37 °C-on termosztátban) inkubáljuk. Ezután mosás nélkül 50 μl konjugátum-3-at adunk a tabletta üregeibe a p24 antigén meghatározásához, és 50 µl konjugátum-4-et az antitestek meghatározásához. Miután 20 percig 37 °C-on rázógépen (vagy 30 percig 37 °C-on termosztátban) inkubáltuk, a lemezt megmossuk és előhívjuk a szubsztrátumkeverékkel. A teljes reakcióidő 1 óra 25 perc (vagy 1 óra 50 perc). A tesztmintában jelenlévő p24 antigén a p24 elleni monoklonális antitestekhez kötődik, és a specifikus antitestek komplexet képeznek a lemezen lévő rekombináns antigénekkel. A létrejövő anti-p24 és p24 immunkomplexet anti-p24-biotin konjugátumokkal, majd sztreptavidin-peroxidázzal, az Ag-HIV és At-HIV immunkomplexeit pedig Ag-biotin konjugátummal, majd sztreptavidin-peroxidázzal mutatjuk ki. .

A reakció beállításának sémája.

Az eredmények számbavétele spektrofotometriával történik két hullámhosszon: 450 /620-680 nm, a műszer „levegő” állásban van. Vegyük figyelembe az eredményeket egy 450 nm-es hullámhosszon.

Az elemzés eredményeit figyelembe veszik, ha az optikai sűrűség (OD) átlagos értéke a K- lyukakban nem haladja meg a 0,2-t, a K+-os lyukakban pedig nem kevesebb, mint 1,0. OP krit. képlettel számolva:

OP krit. gp41 = vö. érték OP K-(gp41)+0,15

OP krit. gp120 = vö. érték OP K-(gp120)+0,15

OP krit. p24 = vö. érték OP K-(р24)+0,15

OP krit. p31 = vö. érték OP K-(р31)+0,15

OP krit. gp36 = vö. érték OP K-(gp36)+0,15

OP krit. Ag p24 = vö. érték OD to- (Ag p24)+0,04

ahol 0,15 és 0,04 a gyártó statisztikai feldolgozási módszerével megállapított együtthatók. A tesztrendszer fejlesztése során a következőket használták:

1. Egészséges donorok vérszérummintái (n=610).

2. Vérszérum minták különböző betegektől fertőző betegségek nem jár HIV-vel (ARI, tüdőgyulladás, mandulagyulladás, herpeszes és citomegalovírus fertőzések, szifilisz, chlamydia, vírusos hepatitisz A, B és C (n=224)).

3. Különböző nem fertőző betegségekben - sérülések, szív- és érrendszeri betegségek, onkológia - betegek vérszérummintái (n=35).

4. Terhes nők vérszérummintái (n=40).

5. ELISA-ban szeropozitív és immunblottal igazolt vérszérumminták (n=428).

6. A HIV 1,2 antitestek és a p24 antigén egyidejű meghatározására szolgáló enzim immunoassay tesztrendszerekben kapott pozitív eredményű szérumminták és határozatlan immunblot eredmény (n=123).

7. HIV 1.2 elleni antitesteket tartalmazó és nem tartalmazó szérumok belső panelje, az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériuma által regisztrált enzim-immunoassay-vel és immunblottal tesztelve (n=21).

8. Szabvány "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Franciaország, kat. No. 72217, amely egy víruslizátumból nyert antigén.

9. A vállalkozás belső színvonala. 200 pg/ml koncentrációban p 24 antigént tartalmazó minta, amelyet víruslizátumból nyertünk és a "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" cég "BIO RAD", Franciaország, kat. 72217 sz.

10. Az első típusú humán immundeficiencia vírus (HIV 1) elleni antitesteket tartalmazó szérumok standard panelje – OSO 42-28-212-93-02P, Medico-Biological Union, Novoszibirszk.

11. A második típusú humán immunhiány vírus (HIV 2) elleni antitesteket tartalmazó standard szérum panel - OSO-42-28-216-02P, Medico-Biological Union, Novoszibirszk.

12. Szabványos szérumpanel, amely nem tartalmaz antitesteket az első és a második típusú humán immunhiány vírus (HIV 1, 2) ellen - OSO-42-28-214-94-02P, Medico-Biological Union, Novoszibirszk.

A p24 antigén kimutatására szolgáló tesztrendszer érzékenységének értékelése a vállalat belső standardja, a „HIV I ANTIGEN STANDARD”, „BIO RAD” szabvány segítségével történt. A belső standardot használva 4 egymást követő, 40 pg/ml-től 5 pg/ml-ig terjedő, kétszeres hígítást készítettünk HIV 1, 2 elleni antitestektől mentes normál donorplazmával hígítóként. A kimutatható antigén legkisebb mennyiségét vettük érzékenységi kritériumnak. A kapott adatokat az 1. táblázat tartalmazza.

A specifikus antitestek kimutatására szolgáló tesztrendszer érzékenységének felmérésére a humán immundeficiencia vírus (HIV 1, 2) elleni antitesteket tartalmazó standard mintapaneleket használtuk (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) 003. o.).

A kapott adatokat a 3., 4. táblázat tartalmazza.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer diagnosztikai hatékonyságát összehasonlították a "Jenscrin-HIV-Ag/Am" (Bio-Rad), "DIA-HIV" tesztrendszerekkel. 1 /2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Ebből a célból a belső panelről vett szérummintákat az összes jelzett tesztben tesztelték. Az 5. táblázatban bemutatott eredmények a "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" magas diagnosztikai hatékonyságát jelzik.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer érzékenységi vizsgálatait is elvégezték az immunbloton HIV-pozitívnak igazolt betegek vérszérumával. Ezekből a szérumokból összesen 428 mintát vizsgáltak meg. Számos lehetőség született a különböző HIV-fehérjék és p24-antigén elleni antitestek kimutatására. Az eredményeket a 6. táblázat tartalmazza.

6. táblázat Különféle HIV 1 fehérjék és p24 antigén elleni antitestek kimutatásának eredményei HIV 1 pozitív szérumok tesztelésekor (n=428)
% észlelés	Fehérje profil
	anti-gr41	anti-gr120	anti-r24	anti-r31	p24
51,1%	+	+	+	+	-
35,3%	+	-	+	+	-
4%	+	-	+	-	-
3,3%	+	-	-	+	-
1,4%	+	-	-	+	+
1,2%	+	+	+	+	+
1,2%	+	+	-	+	+
0,9%	+	-	+	+	+
0,7%	+	-	+	-	+
0,5%	+	-	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	-
Az egyes fehérjék vagy Ag p24 elleni antitestek %-os kimutatása	100%	53,9%	93,2%	94,4%	6,1%

A HIV 1 pozitív minták tesztelésekor a szérumok 3%-a mutatott pozitív reakciót a gp36-tal (env HIV 2). MP/OPcrit ezekben a mintákban nem haladta meg a 2,0-t. A HIV 1 (gp41) és HIV 2 (gp36) külső burok fehérjéinek keresztreaktivitására vonatkozó adataink összhangban vannak az irodalmi adatokkal.

Az eredmények értelmezése

A "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" standard és belső panelekből származó HIV-pozitív szérumok és minták tesztelésének elemzése lehetővé tette a teszt eredményeinek értelmezésére szolgáló kritériumok kidolgozását. A javasolt kritériumokat a 7. táblázat tartalmazza.

Ezen kritériumok alapján az összes HIV pozitív szérummintát (n=428) pozitívnak azonosították a "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1" vizsgálatban. A HIV-ellenes antitesteket tartalmazó standard panel 16 mintájából 14 pozitív, 2 pedig határozatlan. A HIV 2 elleni antitesteket tartalmazó standard panel mind a 8 mintája pozitívnak bizonyult. A HIV-ellenes antitesteket tartalmazó belső panel 10 mintájából 1-et azonosítottak pozitívnak, 3-at pedig határozatlannak.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer érzékenységi vizsgálatait olyan betegek vérszérumával is elvégezték, akik pozitív eredményt értek el az antitesteket és a p24 antigént egyidejűleg kimutató enzim immunoassay tesztrendszerekben, és meghatározatlan az immunblotban . Összesen 123 ilyen mintát vizsgáltak meg. Az adatokat a 8. táblázat tartalmazza.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" vizsgálatban meghatározatlan immunoblot eredménnyel (n=123) végzett szérumok tesztelésekor 72 minta (58,5%) mutatott pozitív eredményt. Ebből 26 szérum (21,1%) csak p24-re, 20 (16,3%) - csak antitestekre, 16 (13%) - p24-re pozitív az egyik fehérje ellenanyagával, 10 (8,1%) - p24-en. két vagy több fehérje elleni antitestek. Így önmagában az antitestek tesztelése (nincs p24 kimutatása) 30 minta (24,4%) lenne pozitív. A tesztben a p24 antigén kimutatása további 42 minta (34,1%) pozitív meghatározását tette lehetővé.

A tesztrendszer specifitásának értékelésére egy standard szérum panelt használtunk, amely nem tartalmazott HIV 1, 2 elleni antitesteket (n=20); egészséges donorok vérszérummintái (n=610), HIV-vel nem összefüggő különféle fertőző betegségekben szenvedő betegek vérszérummintái (n=224); különböző nem fertőző betegségekben - sérülésekben, szív- és érrendszeri betegségekben, onkológiában - szenvedő betegek vérszérummintái (n=35); terhes nők vérszérummintái (n=40). Összesen 929 mintát vizsgáltak meg. Az egészséges donorok vérszérumából vett egy minta hamis pozitív eredményt mutatott - gp41 és p24 elleni antitesteket mutattak ki. Egészséges donoroktól származó 7 vérszérumminta és 2 HIV-vel nem társuló fertőző betegségben szenvedő betegek vérszérummintája mutatott hamis pozitív eredményt a p24-re.

A vizsgálati rendszer specifitásának értékelésére negatív mintákból álló standard panelt használtunk (OSO 42-28-214-94-02p, 009. o.). A specificitás 100% volt.

Így az elvégzett vizsgálatok kimutatták, hogy a "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer specificitása 99%-os normál donorok és különböző fertőző betegségekben szenvedő betegek vérszérummintáinak vizsgálatában. és szomatikus betegségek.

A kapott adatok a kifejlesztett "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer magas diagnosztikai hatékonyságát mutatják. A tesztrendszer felhasználható a HIV 1-es és 2-es típusú egyedi fehérjéi és a HIV1 p24 antigén elleni antitestek kimutatására, hogy megerősítsék a pozitív szűrési eredményt antitesteket detektáló tesztrendszerekkel, vagy olyan tesztrendszerekkel, amelyek egyidejűleg detektálják az antitesteket és a HIV1 p24 antigént. A tesztrendszer alternatív immunblot tesztként használható a pozitív eredmények megerősítésére, valamint a HIV és a p24 antigén elleni antitestek dinamikájának tanulmányozására. különböző szakaszaiban fertőzések.

A TESZT ELŐNYEI

1. Megerősítő enzim immunoassay lemez formátum

2. Megerősítő teszt a HIV 1, 2 antitest spektrum és a HIV 1 p24 antigén kombinációjával

3. Az összes Ig osztályú antitestek kimutatása

4. A p24 kimutatásának érzékenysége nem kevesebb, mint 5 pg/ml

5. Csökkenti a határozatlan eredményeket az immunblothoz képest

6. Elemzési idő - 1 óra 25 perc (immunblot - 3-20 óra)

7. Az összes alkatrész és minta bevezetésének vizuális értékelése.

1. ELISA tesztrendszer az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV) elleni antitestek spektrumának azonosítására, az O csoport első típusára, valamint a p24 első típusú humán immundeficiencia vírussal szembeni p24 antigén kimutatására, azzal jellemezve, hogy gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antitesteken alapuló immunszorbenst tartalmaz A HIV-antigén 1 p24-hez és a detektáló reagensekhez, míg a fenti HIV-antigének és HIV-antitestek a lemezek különböző üregeiben adszorbeálódnak az enzim immunológiai vizsgálathoz.

2. Az 1. igénypont szerinti ELISA tesztrendszer, azzal jellemezve, hogy a szorpcióhoz 96 lyukú polisztirol összenyomható vagy nem összecsukható lemezeket használunk enzim immunológiai vizsgálathoz.