एचआईवी के निदान में कॉम्बिबेस्ट परीक्षण का उपयोग। एचआईवी संक्रमण के निदान के लिए आधुनिक तरीके वीडियो: आधुनिक एंजाइम इम्यूनोएसे

एचआईवी संक्रमण का समय पर निदान एक अत्यंत महत्वपूर्ण उपाय बन जाता है, क्योंकि प्रारंभिक उपचार काफी हद तक रोग के आगे के विकास को निर्धारित कर सकता है और रोगी के जीवन को लम्बा खींच सकता है। हाल के वर्षों में, इस भयानक बीमारी का पता लगाने के क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रगति हुई है: पुरानी परीक्षण प्रणालियों को अधिक उन्नत लोगों द्वारा प्रतिस्थापित किया जा रहा है, परीक्षा विधियां अधिक सुलभ हो रही हैं, और उनकी सटीकता में काफी वृद्धि हुई है।

इस लेख में हम एचआईवी संक्रमण के निदान के आधुनिक तरीकों के बारे में बात करेंगे, जिन्हें जानना इस समस्या के समय पर इलाज और रोगी के जीवन की सामान्य गुणवत्ता को बनाए रखने के लिए उपयोगी है।

एचआईवी के निदान के तरीके

रूस में, एचआईवी संक्रमण के निदान के लिए एक मानक प्रक्रिया अपनाई जाती है, जिसमें दो स्तर शामिल हैं:

• एलिसा परीक्षण प्रणाली (स्क्रीनिंग विश्लेषण);
• इम्यून ब्लॉटिंग (आईबी)।

अन्य निदान विधियों का भी उपयोग किया जा सकता है:

• एक्सप्रेस परीक्षण.

एलिसा परीक्षण प्रणाली

निदान के पहले चरण में, एचआईवी संक्रमण का पता लगाने के लिए एक स्क्रीनिंग टेस्ट (एलिसा) का उपयोग किया जाता है, जो प्रयोगशालाओं में बनाए गए एचआईवी प्रोटीन पर आधारित होता है जो संक्रमण के जवाब में शरीर में उत्पादित विशिष्ट एंटीबॉडी को पकड़ता है। परीक्षण प्रणाली के अभिकर्मकों (एंजाइमों) के साथ उनकी बातचीत के बाद, संकेतक का रंग बदल जाता है। इसके अलावा, इन रंग परिवर्तनों को विशेष उपकरणों पर संसाधित किया जाता है, जो किए गए विश्लेषण के परिणाम को निर्धारित करता है।

ऐसे एलिसा परीक्षण एचआईवी संक्रमण की शुरुआत के कुछ हफ्तों के भीतर परिणाम दिखाने में सक्षम हैं। यह विश्लेषण वायरस की उपस्थिति का निर्धारण नहीं करता है, बल्कि इसके प्रति एंटीबॉडी के उत्पादन का पता लगाता है। कभी-कभी, मानव शरीर में, एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी का उत्पादन संक्रमण के 2 सप्ताह बाद शुरू होता है, लेकिन ज्यादातर लोगों में वे बाद की तारीख में, 3-6 सप्ताह के बाद उत्पन्न होते हैं।

अलग-अलग संवेदनशीलता वाले एलिसा परीक्षण की चार पीढ़ियाँ होती हैं। हाल के वर्षों में, III और IV पीढ़ी की परीक्षण प्रणालियों का अधिक बार उपयोग किया गया है, जो सिंथेटिक पेप्टाइड्स या पुनः संयोजक प्रोटीन पर आधारित हैं और इनमें अधिक विशिष्टता और सटीकता है। उनका उपयोग एचआईवी संक्रमण का निदान करने, एचआईवी प्रसार की निगरानी करने और दान किए गए रक्त का परीक्षण करते समय सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए किया जा सकता है। III और IV पीढ़ी के एलिसा परीक्षण प्रणालियों की सटीकता 93-99% है (अधिक संवेदनशील परीक्षण देशों में उत्पादित किए जाते हैं) पश्चिमी यूरोप – 99%).

एलिसा परीक्षण करने के लिए रोगी की नस से 5 मिलीलीटर रक्त लिया जाता है। अंतिम भोजन और विश्लेषण के बीच कम से कम 8 घंटे का समय होना चाहिए (एक नियम के रूप में, यह सुबह खाली पेट किया जाता है)। इस तरह के परीक्षण को कथित संक्रमण के 3 सप्ताह से पहले नहीं लेने की सलाह दी जाती है (उदाहरण के लिए, एक नए यौन साथी के साथ असुरक्षित संभोग के बाद)।

एलिसा परीक्षण के परिणाम 2-10 दिनों के बाद प्राप्त होते हैं:

• नकारात्मक परिणाम: एचआईवी संक्रमण की अनुपस्थिति को इंगित करता है और किसी विशेषज्ञ के पास रेफरल की आवश्यकता नहीं होती है;
• गलत-नकारात्मक परिणाम: संक्रमण के शुरुआती चरणों (3 सप्ताह तक) में, गंभीर प्रतिरक्षा दमन और अनुचित रक्त तैयारी के साथ एड्स के बाद के चरणों में देखा जा सकता है;
• गलत सकारात्मक परिणाम: कुछ बीमारियों में और अनुचित रक्त तैयारी के मामले में देखा जा सकता है;
• सकारात्मक परिणाम: एचआईवी संक्रमण से संक्रमण का संकेत देता है, आईबी की आवश्यकता होती है और रोगी को एड्स केंद्र के विशेषज्ञ के पास रेफर करना पड़ता है।

एलिसा परीक्षण गलत सकारात्मक परिणाम क्यों दे सकता है?

एचआईवी के लिए एलिसा परीक्षण के गलत-सकारात्मक परिणाम रक्त के अनुचित प्रसंस्करण या ऐसी स्थितियों और बीमारियों वाले रोगियों में देखे जा सकते हैं:

• एकाधिक मायलोमा;
• एपस्टीन-बार वायरस से उत्पन्न संक्रामक रोग;
• के बाद राज्य;
• स्व - प्रतिरक्षित रोग;
• गर्भावस्था की पृष्ठभूमि के खिलाफ;
• टीकाकरण के बाद की स्थिति

ऊपर वर्णित कारणों से, रक्त में गैर-विशिष्ट क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीबॉडी मौजूद हो सकते हैं, जिनका उत्पादन एचआईवी संक्रमण से उत्पन्न नहीं हुआ था।

हाल के वर्षों में, III और IV पीढ़ी के परीक्षण प्रणालियों के उपयोग के कारण गलत सकारात्मक परिणामों की आवृत्ति में काफी कमी आई है, जिनमें अधिक संवेदनशील पेप्टाइड और पुनः संयोजक प्रोटीन होते हैं (इन्हें इन विट्रो जेनेटिक इंजीनियरिंग का उपयोग करके संश्लेषित किया जाता है)। ऐसे एलिसा परीक्षणों के उपयोग के बाद, गलत सकारात्मक परिणामों की आवृत्ति में काफी कमी आई है और यह लगभग 0.02-0.5% है।

गलत सकारात्मक परिणाम का मतलब यह नहीं है कि कोई व्यक्ति एचआईवी से संक्रमित है। ऐसे मामलों में, WHO एक और एलिसा परीक्षण (अनिवार्य IV पीढ़ी) की सिफारिश करता है।

रोगी के रक्त को "रिपीट" के रूप में चिह्नित एक संदर्भ या मध्यस्थता प्रयोगशाला में भेजा जाता है और IV पीढ़ी के एलिसा परीक्षण प्रणाली पर परीक्षण किया जाता है। यदि नए विश्लेषण का परिणाम नकारात्मक है, तो पहले परिणाम को गलत (झूठा सकारात्मक) माना जाता है और आईबी नहीं किया जाता है। यदि दूसरे परीक्षण के दौरान परिणाम सकारात्मक या संदिग्ध होता है, तो रोगी को एचआईवी संक्रमण की पुष्टि या खंडन करने के लिए 4-6 सप्ताह में आईबी से गुजरना पड़ता है।

प्रतिरक्षा धब्बा

एचआईवी संक्रमण का निश्चित निदान सकारात्मक इम्यून ब्लॉटिंग (आईबी) परिणाम प्राप्त होने के बाद ही किया जा सकता है। इसके कार्यान्वयन के लिए, एक नाइट्रोसेल्यूलोज पट्टी का उपयोग किया जाता है, जिस पर वायरल प्रोटीन लगाया जाता है।

आईबी के लिए रक्त का नमूना नस से लिया जाता है। फिर इसे विशेष उपचार के अधीन किया जाता है और इसके सीरम में मौजूद प्रोटीन को उनके चार्ज और आणविक भार के अनुसार एक विशेष जेल में अलग किया जाता है (विद्युत क्षेत्र के प्रभाव में विशेष उपकरणों पर हेरफेर किया जाता है)। रक्त सीरम जेल पर एक नाइट्रोसेल्यूलोज पट्टी लगाई जाती है और एक विशेष कक्ष में ब्लॉटिंग ("ब्लॉटिंग") किया जाता है। पट्टी को संसाधित किया जाता है और यदि उपयोग की गई सामग्री में एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, तो वे आईबी पर एंटीजेनिक बैंड से जुड़ जाते हैं और रेखाओं के रूप में दिखाई देते हैं।

IB को सकारात्मक माना जाता है यदि:

• अमेरिकी सीडीसी मानदंडों के अनुसार - पट्टी पर दो या तीन लाइनें gp41, p24, gp120 / gp160 हैं;
• अमेरिकी एफडीए मानदंडों के अनुसार - पट्टी पर दो लाइनें p24, p31 और एक लाइन gp41 या gp120 / gp160 हैं।

99.9% मामलों में, एक सकारात्मक आईबी परिणाम एचआईवी संक्रमण का संकेत देता है।

रेखाओं के अभाव में - IB ऋणात्मक है।

जीपी160, जीपी120 और जीपी41 के साथ लाइनों की पहचान करते समय, आईबी संदिग्ध है। ऐसे परिणाम का पता तब लगाया जा सकता है जब:

• ऑन्कोलॉजिकल रोग;
• गर्भावस्था;
• बार-बार रक्त आधान करना।

ऐसे मामलों में, किसी अन्य कंपनी की किट का उपयोग करके दूसरा अध्ययन करने की सिफारिश की जाती है। यदि, अतिरिक्त आईबी के बाद, परिणाम संदिग्ध रहता है, तो छह महीने तक फॉलो-अप आवश्यक है (आईबी हर 3 महीने में किया जाता है)।

पोलीमरेज श्रृंखला अभिक्रिया

पीसीआर परीक्षण वायरस के आरएनए का पता लगा सकता है। इसकी संवेदनशीलता काफी अधिक है और यह संक्रमण के 10 दिन बाद ही एचआईवी संक्रमण का पता लगाने में सक्षम है। कुछ मामलों में, पीसीआर गलत सकारात्मक परिणाम दे सकता है, क्योंकि इसकी उच्च संवेदनशीलता अन्य संक्रमणों के प्रति एंटीबॉडी पर भी प्रतिक्रिया कर सकती है।

यह निदान तकनीक महंगी है, इसके लिए विशेष उपकरण और उच्च योग्य विशेषज्ञों की आवश्यकता होती है। ये कारण जनसंख्या के बड़े पैमाने पर परीक्षण के दौरान इसे करने की अनुमति नहीं देते हैं।

पीसीआर का उपयोग ऐसे मामलों में किया जाता है:

• एचआईवी संक्रमित माताओं से पैदा हुए नवजात शिशुओं में एचआईवी का पता लगाने के लिए;
• "विंडो अवधि" में या संदिग्ध आईबी के मामले में एचआईवी का पता लगाने के लिए;
• रक्त में एचआईवी की सांद्रता को नियंत्रित करने के लिए;
• दाता रक्त के अध्ययन के लिए.

केवल पीसीआर परीक्षण से एचआईवी का निदान नहीं किया जाता है, बल्कि किया जाता है अतिरिक्त विधिविवादों को सुलझाने के लिए निदान.

एक्सप्रेस तरीके

एचआईवी निदान में नवाचारों में से एक तेजी से परीक्षण बन गया है, जिसके परिणामों का मूल्यांकन 10-15 मिनट में किया जा सकता है। केशिका प्रवाह के सिद्धांत पर आधारित इम्यूनोक्रोमैटोग्राफिक परीक्षणों से सबसे कुशल और सटीक परिणाम प्राप्त होते हैं। वे विशेष स्ट्रिप्स हैं जिन पर रक्त या अन्य परीक्षण तरल पदार्थ (लार, मूत्र) लगाए जाते हैं। एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति में, 10-15 मिनट के बाद, परीक्षण पर एक रंगीन और नियंत्रण पट्टी दिखाई देती है - एक सकारात्मक परिणाम। यदि परिणाम नकारात्मक है, तो केवल नियंत्रण रेखा दिखाई देती है।

एलिसा परीक्षणों की तरह, रैपिड परीक्षण के परिणामों की पुष्टि आईबी विश्लेषण द्वारा की जानी चाहिए। तभी एचआईवी संक्रमण का निदान किया जा सकता है।

घरेलू परीक्षण के लिए एक्सप्रेस किट हैं। OraSure Technologies1 (USA) परीक्षण FDA द्वारा अनुमोदित है, बिना प्रिस्क्रिप्शन के उपलब्ध है, और इसका उपयोग एचआईवी का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। परीक्षण के बाद, सकारात्मक परिणाम के मामले में, रोगी को निदान की पुष्टि के लिए एक विशेष केंद्र में जांच कराने की सलाह दी जाती है।

घरेलू उपयोग के लिए शेष परीक्षणों को अभी तक एफडीए द्वारा अनुमोदित नहीं किया गया है और उनके परिणाम बहुत संदिग्ध हो सकते हैं।

इस तथ्य के बावजूद कि तीव्र परीक्षण IV-पीढ़ी के एलिसा परीक्षणों की सटीकता से कमतर हैं, उनका व्यापक रूप से जनसंख्या के अतिरिक्त परीक्षण के लिए उपयोग किया जाता है।

आप एचआईवी संक्रमण के लिए किसी भी पॉलीक्लिनिक, केंद्रीय क्षेत्रीय अस्पताल या विशेष एड्स केंद्रों पर परीक्षण करवा सकते हैं। रूस के क्षेत्र में, उन्हें बिल्कुल गोपनीय या गुमनाम रूप से रखा जाता है। प्रत्येक रोगी विश्लेषण से पहले या बाद में चिकित्सा या मनोवैज्ञानिक सलाह प्राप्त करने की उम्मीद कर सकता है। आपको केवल वाणिज्यिक चिकित्सा संस्थानों में एचआईवी परीक्षणों के लिए भुगतान करना होगा, और सार्वजनिक क्लीनिकों और अस्पतालों में वे निःशुल्क किए जाते हैं।

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अध्ययन के बारे में सामान्य जानकारी

एचआईवी (ह्यूमन इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस) रेट्रोवायरस परिवार का एक वायरस है जो कोशिकाओं को संक्रमित करता है प्रतिरक्षा तंत्रमानव (सीडी4, टी-हेल्पर्स)। एड्स का कारण बनता है.

एचआईवी-1 सबसे आम प्रकार का वायरस है, जो अक्सर रूस, अमेरिका, यूरोप, जापान और ऑस्ट्रेलिया (आमतौर पर उपप्रकार बी) में पाया जाता है।

एचआईवी-2 एक दुर्लभ प्रकार है, जो पश्चिम अफ़्रीका में आम है।

मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के निदान के लिए, एक संयुक्त चौथी पीढ़ी की परीक्षण प्रणाली का उपयोग किया जाता है, जो वायरस के रक्त में प्रवेश करने के 2 सप्ताह बाद ही एचआईवी संक्रमण का पता लगाने में सक्षम है, जबकि पहली पीढ़ी की परीक्षण प्रणाली केवल 6-12 सप्ताह में ऐसा करती है। संक्रमण के बाद.

इस संयुक्त एचआईवी परख का लाभ अभिकर्मकों के रूप में एचआईवी-1 पी24 के प्रति एंटीबॉडी के उपयोग के कारण विशिष्ट पी24 एंटीजन (वायरल कैप्सिड प्रोटीन) का पता लगाना है, जिसे संक्रमण के 1-4 सप्ताह बाद ही इस परीक्षण द्वारा पता लगाया जा सकता है। यानी सीरोकनवर्ज़न से पहले भी, जो "विंडो अवधि" को काफी कम कर देता है।

इसके अलावा, ऐसा एचआईवी परीक्षण रक्त में एचआईवी-1 और एचआईवी-2 के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाता है (एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का उपयोग करके), जो उस क्षण से 2-8 सप्ताह के बाद परीक्षण प्रणाली द्वारा निर्धारित करने के लिए पर्याप्त मात्रा में उत्पन्न होते हैं। संक्रमण का.

सेरोकनवर्ज़न के बाद, एंटीबॉडीज़ p24 एंटीजन से जुड़ना शुरू कर देती हैं, जिसके परिणामस्वरूप एचआईवी एंटीबॉडी परीक्षण सकारात्मक और नकारात्मक p24 परीक्षण होता है। हालाँकि, कुछ समय बाद, रक्त में एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों एक ही समय में पाए जाएंगे। अंतिम चरण में, एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी के लिए एड्स परीक्षण नकारात्मक परिणाम दे सकता है, क्योंकि एंटीबॉडी के उत्पादन की प्रक्रिया बाधित हो जाती है।

एचआईवी संक्रमण के चरण

1. ऊष्मायन अवधि, या "सेरोनिगेटिव विंडो अवधि", संक्रमण के क्षण से लेकर रक्त में वायरस के लिए सुरक्षात्मक एंटीबॉडी के उत्पादन तक का समय है, जब एचआईवी के लिए एंटीबॉडी के परीक्षण नकारात्मक होते हैं, लेकिन व्यक्ति पहले से ही वायरस को प्रसारित कर सकता है अन्य लोग। इस अवधि की अवधि 2 सप्ताह से 6 माह तक होती है।
2. तीव्र काल एचआईवी संक्रमणसंक्रमण के औसतन 2-4 सप्ताह बाद होता है और लगभग 2-3 सप्ताह तक रहता है। इस स्तर पर, कुछ लोगों में वायरस की सक्रिय प्रतिकृति के कारण गैर-विशिष्ट फ्लू जैसे लक्षण विकसित हो सकते हैं।
3. अव्यक्त अवस्था स्पर्शोन्मुख होती है, लेकिन इसके दौरान रोग प्रतिरोधक क्षमता में धीरे-धीरे कमी आती है और रक्त में वायरस की मात्रा में वृद्धि होती है।
4. एड्स (एक्वायर्ड इम्यून डेफिशिएंसी सिंड्रोम) एचआईवी संक्रमण का अंतिम चरण है, जो प्रतिरक्षा प्रणाली के गंभीर दमन के साथ-साथ सहवर्ती रोगों, एन्सेफैलोपैथी या ऑन्कोलॉजिकल रोग.

इस तथ्य के बावजूद कि एचआईवी संक्रमण लाइलाज है, आज अत्यधिक सक्रिय एंटीरेट्रोवाइरल थेरेपी (एआरटी) है, जो एचआईवी संक्रमित व्यक्ति के जीवन को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ा सकती है और इसकी गुणवत्ता में सुधार कर सकती है।

यदि एचआईवी संक्रमण परीक्षण के समय (2-4 सप्ताह) से कुछ समय पहले हुआ हो तो इस परीक्षण का विशेष रूप से उच्च नैदानिक ​​महत्व है।

अनुसंधान का उपयोग किस लिए किया जाता है?

विश्लेषण का प्रयोग किया जाता है शीघ्र निदानएचआईवी, जो अन्य लोगों में वायरस के आगे संचरण को रोकने में मदद करता है, साथ ही समय पर एंटीरेट्रोवाइरल थेरेपी शुरू करने और उन बीमारियों का इलाज करने में मदद करता है जो एचआईवी संक्रमण की प्रगति में योगदान करते हैं।

अध्ययन कब निर्धारित है?

• अस्पष्ट एटियलजि के लगातार लक्षणों (2-3 सप्ताह तक) के साथ: निम्न ज्वर तापमान, दस्त, रात को पसीना, अचानक वजन कम होना, वृद्धि लसीकापर्व.
• बार-बार होने वाले हर्पीस संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस, निमोनिया, तपेदिक, टोक्सोप्लाज़मोसिज़ के साथ।
• यदि रोगी यौन संचारित रोगों (सिफलिस, क्लैमाइडिया, गोनोरिया, जननांग दाद, बैक्टीरियल वेजिनोसिस) से पीड़ित है।
• यदि रोगी ने कई यौन साझेदारों, किसी नए साथी या किसी ऐसे साथी के साथ असुरक्षित योनि, गुदा या मुख मैथुन किया है जिसकी एचआईवी स्थिति के बारे में रोगी अनिश्चित है।
• जब रोगी को रक्त आधान प्रक्रिया से गुजरना पड़ा (हालांकि इस तरह से संक्रमण के मामलों को व्यावहारिक रूप से बाहर रखा गया है, क्योंकि वायरल कणों की उपस्थिति के लिए रक्त का सावधानीपूर्वक परीक्षण किया जाता है और विशेष गर्मी उपचार से गुजरना पड़ता है)।
• यदि रोगी ने गैर-बाँझ उपकरणों का उपयोग करके दवाओं का इंजेक्शन लगाया है।
• गर्भावस्था/गर्भावस्था की योजना के दौरान (गर्भावस्था के दौरान एजेडटी, जन्म नहर के माध्यम से बच्चे में वायरस के संचरण को रोकने के लिए सिजेरियन सेक्शन, और स्तनपान न कराने से मां से बच्चे में एचआईवी के संचरण का जोखिम 30% से कम हो जाता है। 1% तक).
• संक्रमित रक्त युक्त सिरिंज या अन्य वस्तु (जैसे चिकित्सा उपकरण) के साथ आकस्मिक इंजेक्शन (ऐसे मामलों में, संक्रमण की संभावना बेहद कम है)।

इसकी विशिष्ट रोकथाम के तरीकों की कमी और चिकित्सा की अपर्याप्त प्रभावशीलता के कारण एचआईवी संक्रमण को एक अनियंत्रित बीमारी के रूप में वर्गीकृत किया गया है। इसलिए, एचआईवी संक्रमण की महामारी विज्ञान की स्थिति को नियंत्रित करने के लिए वर्तमान में स्क्रीनिंग डायग्नोस्टिक अध्ययन का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है। एचआईवी संक्रमण के निदान के तरीकों में अग्रणी स्थान एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) का है, जो जांच किए गए व्यक्तियों में इस बीमारी के प्रेरक एजेंट के सीरोलॉजिकल मार्करों की पहचान करना संभव बनाता है।

यह रिपोर्ट रोगियों सहित 40,823 लोगों के रक्त सीरम में एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी के निर्धारण के परिणाम प्रस्तुत करती है प्रसवपूर्व क्लिनिक, पॉलीक्लिनिक, शहर के अस्पताल, साथ ही जोखिम वाले रोगियों (नशे के आदी, वायरल हेपेटाइटिस बी, सी और यौन संचारित रोगों वाले रोगियों) की जांच और उपचार में विशेषज्ञता वाले चिकित्सा केंद्र। अध्ययन 2005 में रिसर्च इंस्टीट्यूट ऑफ ऑब्स्टेट्रिक्स एंड गायनेकोलॉजी के इम्यूनोलॉजी प्रयोगशाला में किए गए थे। पहले। रूसी चिकित्सा विज्ञान अकादमी के ओट, जिनके पास विभिन्न संक्रामक रोगों के निदान के लिए एलिसा विधियों के उपयोग में 15 वर्षों से अधिक का अनुभव है।

रक्त सीरम नमूनों की प्रारंभिक जांच के लिए, कॉम्बीबेस्ट एंटी-एचआईवी-1 + 2 परीक्षण प्रणाली (जेडएओ वेक्टर-बेस्ट, नोवोसिबिर्स्क) का उपयोग किया गया था, जो मानव के जांचे गए नमूनों में एचआईवी-1 और एचआईवी-1 के लिए कुल विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाता है। सीरम या रक्त प्लाज्मा। 2 (इम्युनोग्लोबुलिन वर्ग ए, जी और एम)। इस डायग्नोस्टिक किट में, पुनः संयोजक एचआईवी प्रोटीन का उपयोग गोलियों के कुओं में स्थिरीकरण के लिए और हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के साथ संयुग्म के रूप में किया जाता है। सीरा विश्लेषण के परिणामों का मूल्यांकन परीक्षण प्रणाली के निर्देशों के अनुसार किया गया था: नकारात्मक (एचआईवी -1 और एचआईवी -2 के लिए एंटीबॉडी युक्त नहीं) को परीक्षण नमूने माना जाता था, जिनमें से ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) एलिसा में अधिक नहीं था ODcrit मान.

जब प्रयोगशाला में जांच की गई, तो 40,823 सीरम नमूनों में से 40,222 (98.5%) एलिसा के लिए नकारात्मक पाए गए, और परीक्षण किए गए नमूनों में से 601 (1.5%) को शुरू में सकारात्मक माना गया। डुप्लिकेट (टैबलेट के दो कुएं) में 601 सीरा में से प्रत्येक के अगले दिन पुनर्विश्लेषण के परिणामस्वरूप, 440 (73.2%) नमूने सकारात्मक और 161 (26.8%) नकारात्मक के रूप में पहचाने गए। स्वास्थ्य और सामाजिक विकास मंत्रालय की सिफारिशों के अनुसार, 440 स्क्रीनिंग-पॉजिटिव सीरा को फ्रीज कर दिया गया और अस्पताल नंबर की संदर्भ प्रयोगशाला के परामर्श और निदान कक्ष में अतिरिक्त पुष्टिकरण अध्ययन के लिए स्थानांतरित कर दिया गया। एस.पी. बोटकिना। ये अध्ययन एलिसा परीक्षण प्रणाली "एचआईवी 1.2 एजी/एबी के इकोलैब-विरोनोस्टिक्स" ("ईसीओलैब", एलेक्ट्रोगोर्स्क), "जेनस्क्रीन प्लस" का उपयोग करके किए गए थे। HIVएजी-एबी” (बायोरैड, यूएसए), साथ ही इम्युनोब्लॉट किट। पुष्टिकरण परीक्षणों में 440 सीरा के विश्लेषण के परिणामों से यह निष्कर्ष निकला कि 323 (73.4%) नमूने सकारात्मक हैं, और 102 (23.2%) नमूने नकारात्मक हैं। जांचे गए 15 नमूनों (3.4%) के लिए, एक अनिश्चित विश्लेषणात्मक परिणाम प्राप्त हुआ।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इन 323 सकारात्मक सीरा में से 314 (97.2%) के लिए कॉम्बीबेस्ट एंटी-एचआईवी-1+2 परीक्षण प्रणाली का उपयोग करके उनके प्रारंभिक परीक्षण के दौरान हमारी प्रयोगशाला में प्राप्त ओडी मान 0.900 से 1.780 तक थे, और 9 के लिए (2.8%) नमूने - 0.500–0.900। 52 नमूनों (51%) के लिए 102 नकारात्मक सीरा की स्क्रीनिंग से प्राप्त ओडी मान 0.195 से 0.400 तक थे; 40 (39.2%) नमूनों के लिए - 0.401–0.800; 10 (9.8%) नमूने - 0.800 से अधिक।

इस प्रकार, किए गए कार्य के परिणामस्वरूप, यह दिखाया गया कि कॉम्बीबेस्ट एंटी-एचआईवी-1+2 परीक्षण प्रणाली का उपयोग करके एचआईवी संक्रमण के सीरोलॉजिकल मार्करों की उपस्थिति के लिए रक्त सीरा की प्राथमिक जांच अत्यधिक प्रभावी है। 73% मामलों में संदर्भ प्रयोगशाला में अतिरिक्त अध्ययनों द्वारा सकारात्मक स्क्रीनिंग परिणामों की पुष्टि की गई, और विश्लेषण किए गए 40,823 सीरा में से केवल 0.25% के लिए गलत सकारात्मक परिणाम दर्ज किए गए।

विवरण

तैयारी

संकेत

परिणामों की व्याख्या

विवरण

निर्धारण की विधि एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा)।

अध्ययनाधीन सामग्रीसीरम

घर का दौरा उपलब्ध है

एचआईवी प्रकार 1 और 2 और एचआईवी पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का संयुक्त पता लगाना, एक गुणात्मक परीक्षण।

ध्यान। सकारात्मक एवं संदिग्ध प्रतिक्रियाओं की स्थिति में परिणाम जारी करने की अवधि 10 कार्य दिवसों तक बढ़ाई जा सकती है। एचआईवी (मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस), जो एड्स (अधिग्रहित इम्युनोडेफिशिएंसी सिंड्रोम) का कारण बनता है, रेट्रोवायरस के परिवार से संबंधित है। यह अंतःशिरा दवा के उपयोग या चिकित्सीय प्रक्रियाओं के लिए दूषित सुइयों और सीरिंज के उपयोग के माध्यम से, विषमलैंगिक और समलैंगिक दोनों तरह के संभोग के माध्यम से एक व्यक्ति से दूसरे व्यक्ति में फैलता है। वायरस का संचरण संक्रमित रक्त और उसके उत्पादों के आधान, अंगों या वीर्य दान के माध्यम से, स्वास्थ्य कर्मियों में - संक्रमित सुइयों या उपकरणों से घायल होने पर हो सकता है। एचआईवी संक्रमण संक्रमित मां से बच्चे में (ऊर्ध्वाधर मार्ग) संचरण के माध्यम से संभव है, हालांकि एंटीरेट्रोवाइरल थेरेपी का उपयोग करके रोकथाम के आधुनिक तरीके, यदि सभी सिफारिशों का पालन किया जाता है, तो इस जोखिम को न्यूनतम तक कम किया जा सकता है।

किसी कोशिका के साथ वायरस की अंतःक्रिया की प्रक्रिया में कई चरण शामिल होते हैं: कोशिका से वायरस का बंधन, खोल से उसकी रिहाई, साइटोप्लाज्म में प्रवेश, वायरल आरएनए से डीएनए संश्लेषण, और वायरल डीएनए का जीनोम में एकीकरण। मेजबान कोशिका. इसके बाद संक्रमण की गुप्त अवस्था शुरू होती है। इस अवस्था में, प्रोविरल डीएनए बिना गतिविधि दिखाए और मेजबान कोशिका की महत्वपूर्ण गतिविधि को प्रभावित किए बिना कुछ समय तक मौजूद रह सकता है। जब तक वायरल प्रोटीन की कोई अभिव्यक्ति नहीं होती, तब तक वायरस के प्रति कोई प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया नहीं होती। एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी, जो शरीर की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की विशेषता है, वायरल डीएनए के सक्रिय होने और वायरस के सक्रिय प्रजनन की शुरुआत के बाद दिखाई देते हैं। अव्यक्त अवधि की अवधि जीव की व्यक्तिगत आनुवंशिक विशेषताओं सहित कई कारकों पर निर्भर करती है।

संक्रमण के बाद दूसरे सप्ताह से एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी दिखाई दे सकती हैं; उनकी सामग्री 2-4 सप्ताह के भीतर बढ़ जाती है और कई वर्षों तक बनी रहती है। 90-95% संक्रमित लोगों में, वे संक्रमण के बाद पहले तीन महीनों में दिखाई देते हैं, 5-9% में - तीन से छह महीने की अवधि में, 0.5-1% में - बाद की तारीख में।

संक्रमण के पहले हफ्तों में, वायरस के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति से पहले (यानी, सेरोकनवर्जन से पहले), सीरम या प्लाज्मा नमूनों में इसके पी 24 कैप्सिड प्रोटीन सहित एचआईवी एंटीजन की उपस्थिति का पता लगाया जा सकता है। बाद में, सेरोकनवर्ज़न के बाद, यह आमतौर पर पता नहीं चल पाता है।

चौथी पीढ़ी के संयोजन परीक्षण, जैसे एचआईवी एजी/एबी कॉम्बो परीक्षण (आर्किटेक्ट, एबॉट), एचआईवी प्रकार 1 और 2 एंटीबॉडी और एचआईवी पी24 एंटीजन दोनों का पता लगाते हैं, जिससे संक्रमण का शीघ्र पता लगाने में मदद मिलती है। एचआईवी संक्रमण का पता लगाने के लिए इनविट्रो प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले स्क्रीनिंग टेस्ट की विशेष विशेषताओं में अध्ययन की उच्च विशिष्टता (> 99.5%) शामिल है; सेरोकनवर्ज़न अवधि की विशेषता वाले एंटीबॉडी के प्रति परख की 100% संवेदनशीलता, और पी24 एंटीजन के प्रति परीक्षण की संवेदनशीलता लगभग 18 पीजी/एमएल है।

एचआईवी के लिए प्रयोगशाला परीक्षण की प्रक्रिया को रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेशों द्वारा सख्ती से विनियमित किया जाता है और इसमें उपयोग के लिए अनुमोदित एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा) विधियों द्वारा एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति की स्क्रीनिंग (स्क्रीनिंग) अध्ययन का चरण शामिल है। , और शहर एड्स केंद्र की प्रयोगशाला में अधिक विस्तृत अध्ययन के सत्यापन (पुष्टि) का चरण। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि सबसे अच्छी स्क्रीनिंग एलिसा प्रणाली भी 100% विशिष्टता की गारंटी नहीं देती है, यानी, रोगी के रक्त सीरम की विशेषताओं से जुड़े गैर-विशिष्ट, गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त करने की कुछ संभावना है। इसलिए, पुष्टिकरण परीक्षणों में सकारात्मक स्क्रीनिंग एलिसा परिणाम की पुष्टि नहीं की जा सकती है, जिसके बाद रोगी को नकारात्मक या अनिश्चित परिणाम दिया जाएगा। यदि पुष्टिकरण अध्ययन का परिणाम अनिश्चित है, तो परीक्षण 2-3 सप्ताह में गतिशीलता में दोहराया जाना चाहिए।

एचआईवी संक्रमित माताओं से पैदा हुए बच्चों में एचआईवी संक्रमण के प्रयोगशाला निदान की अपनी विशेषताएं हैं। एचआईवी (आईजीजी वर्ग) के प्रति मातृ एंटीबॉडी जन्म के क्षण से 18 महीने तक उनके रक्त में प्रसारित हो सकती हैं। नवजात शिशुओं में एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी की अनुपस्थिति का मतलब यह नहीं है कि वायरस ने प्लेसेंटल बाधा को पार नहीं किया है। एचआईवी संक्रमित माताओं के बच्चों की जन्म के 36 महीने के भीतर प्रयोगशाला निदान जांच की जाती है।

तैयारी

विशेष तैयारी की आवश्यकता नहीं है. अंतिम भोजन के 4 घंटे से पहले रक्त का नमूना लेने की सलाह नहीं दी जाती है। शोध की तैयारी के लिए सामान्य सिफारिशें पाई जा सकती हैं। संभावित संक्रमण के बाद दो सप्ताह से पहले एचआईवी के लिए एंटीजन और एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए परीक्षण करने की सलाह दी जाती है, नकारात्मक परिणाम के मामले में इसे तीन और छह सप्ताह के बाद दोहराया जाता है। INVITRO LLC में शोध के लिए आवेदनों का पंजीकरण पासपोर्ट या उसकी जगह लेने वाले दस्तावेज़ (माइग्रेशन कार्ड, निवास स्थान पर अस्थायी पंजीकरण, सर्विसमैन का प्रमाण पत्र, पासपोर्ट खो जाने की स्थिति में पासपोर्ट कार्यालय से प्रमाण पत्र, पंजीकरण कार्ड) के अनुसार किया जाता है। एक होटल से)। प्रस्तुत दस्तावेज़ में रूसी संघ के क्षेत्र में अस्थायी या स्थायी पंजीकरण की जानकारी और एक तस्वीर होनी चाहिए। पासपोर्ट (उसकी जगह लेने वाला दस्तावेज़) के अभाव में, रोगी को बायोमटेरियल की डिलीवरी के लिए एक गुमनाम आवेदन करने का अधिकार है। एक गुमनाम जांच के साथ, ग्राहक से प्राप्त आवेदन और बायोमटेरियल नमूने को एक नंबर दिया जाता है जो केवल मरीज और ऑर्डर देने वाले मेडिकल स्टाफ को पता होता है। ! गुमनाम रूप से किए गए अध्ययनों के परिणाम अस्पताल में भर्ती होने, पेशेवर परीक्षाओं के लिए प्रस्तुत नहीं किए जा सकते हैं, और ORUIB के साथ पंजीकरण के अधीन नहीं हैं।

नियुक्ति के लिए संकेत

• दो से अधिक क्षेत्रों में लिम्फ नोड्स का बढ़ना।
• लिम्फोपेनिया के साथ ल्यूकोपेनिया।
• रात का पसीना।
• अज्ञात कारण से अचानक वजन कम होना।
• अज्ञात कारण से तीन सप्ताह से अधिक समय तक दस्त होना।
• अज्ञात कारण से बुखार आना।
• गर्भधारण की योजना बनाना.
• ऑपरेशन से पहले की तैयारी, अस्पताल में भर्ती।
• निम्नलिखित संक्रमणों या उनके संयोजनों की पहचान: तपेदिक, प्रत्यक्ष टोक्सोप्लाज्मोसिस, अक्सर आवर्ती हर्पीसवायरस संक्रमण, कैंडिडिआसिस आंतरिक अंग, आवर्तक तंत्रिकाशूल हर्पीस-ज़ोस्टर, जो माइकोप्लाज्मा, न्यूमोसिस्टिस या लीजियोनेला निमोनिया के कारण होता है।
• कम उम्र में कपोसी का सारकोमा।
• कैज़ुअल सेक्स.

परिणामों की व्याख्या

परीक्षण परिणामों की व्याख्या में उपस्थित चिकित्सक के लिए जानकारी शामिल है और यह निदान नहीं है। इस अनुभाग की जानकारी का उपयोग स्व-निदान या स्व-उपचार के लिए नहीं किया जाना चाहिए। इस परीक्षा के परिणामों और अन्य स्रोतों से आवश्यक जानकारी का उपयोग करके डॉक्टर द्वारा एक सटीक निदान किया जाता है: इतिहास, अन्य परीक्षाओं के परिणाम, आदि।

स्वतंत्र प्रयोगशाला इनविट्रो में माप की इकाइयाँ: गुणात्मक परीक्षण। परिणामों की प्रस्तुति का रूप: एचआईवी 1 और 2 और पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, उत्तर "नकारात्मक" है। स्क्रीनिंग एलिसा परीक्षण में एचआईवी या एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता चलने पर, सीरम नमूना एक पुष्टिकरण इम्युनोब्लॉट विधि द्वारा विश्लेषण के लिए शहर के एड्स केंद्र में भेजा जाता है, जो सकारात्मक और अनिश्चित परिणामों की पुष्टि करता है।

सकारात्मक परिणाम:

1. एचआईवी संक्रमण;
2. गलत सकारात्मक परिणाम के लिए बार-बार या अतिरिक्त अध्ययन की आवश्यकता होती है*);
3. यह अध्ययन एचआईवी संक्रमित माताओं से पैदा हुए 18 महीने से कम उम्र के बच्चों के बारे में जानकारीपूर्ण नहीं है।

*स्क्रीनिंग परीक्षण प्रणाली की विशिष्टता एचआईवी 1 और 2 के एंटीबॉडी और एचआईवी 1 और 2 के एंटीजन (एचआईवी एजी/एबी कॉम्बो, एबॉट), अभिकर्मकों के निर्माता द्वारा प्रदान किए गए अनुमान के अनुसार, सामान्य आबादी और दोनों में लगभग 99.6% है। संभावित हस्तक्षेप वाले समूह के रोगियों में (एचबीवी, एचसीवी, रूबेला, एचएवी, ईबीवी, एचएनएलवी-I, एचटीएलवी-II, ई.कोली, सीएचएल.ट्रैच., आदि संक्रमण, ऑटोइम्यून पैथोलॉजी (सहित) रूमेटाइड गठिया, एंटीन्यूक्लियर एंटीबॉडी की उपस्थिति), गर्भावस्था, ऊंचा स्तरआईजीजी, आईजीएम, मोनोक्लोनल गैमोपैथी, हेमोडायलिसिस, एकाधिक रक्त आधान)।

पेटेंट आरयू 2283497 के मालिक:

यह आविष्कार जैव प्रौद्योगिकी और चिकित्सा के क्षेत्र से संबंधित है। पहले और दूसरे प्रकार के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी) के लिए एंटीबॉडी के स्पेक्ट्रम की पहचान करने के लिए एलिसा परीक्षण प्रणाली, पहले प्रकार के समूह ओ और पहले प्रकार के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के लिए एंटीजन का पता लगाने के लिए पी 24 में एक इम्युनोसॉरबेंट शामिल है। मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एंटीजन gp41 (env HIV-1 और HIV-2 समूह O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), एचआईवी एंटीजन 1 p24 के प्रति एंटीबॉडी का प्रतिनिधित्व करते हैं। और पता लगाने वाले अभिकर्मकों, जबकि उपरोक्त एचआईवी एंटीजन और एचआईवी एंटीबॉडी को एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए प्लेटों के विभिन्न कुओं में सोख लिया जाता है, और 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टाइनिन बंधने योग्य या गैर-बंधनेवाला प्लेटों का उपयोग सोखने के लिए किया जाता है। आविष्कार परिणामों के मूल्यांकन की बढ़ी हुई संवेदनशीलता, सरलीकरण, व्यक्तिपरकता का बहिष्कार प्रदान करता है। 1 जेड.पी. एफ-ली, 10 टैब., 1 बीमार।

यह आविष्कार जैव प्रौद्योगिकी और चिकित्सा के क्षेत्र से संबंधित है। उपयोग: मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ और एचआईवी 1 पी 24 एंटीजन के प्रोटीन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के सभी वर्गों का विभेदित पता लगाना।

सार: रक्त सीरम (प्लाज्मा), इम्युनोग्लोबुलिन और रक्त उत्पादों में व्यक्तिगत प्रोटीन और एचआईवी 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ और एचआईवी 1 पी 24 एंटीजन के सभी वर्गों के एंटीबॉडी के स्पेक्ट्रम की पहचान करने के लिए एक एंजाइम इम्यूनोएसे परीक्षण प्रणाली प्राप्त करना एचआईवी 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ, एचआईवी 1 पी24 एंटीजन का पता लगाना, और एचआईवी 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ, और एचआईवी 1 पी24 एंटीजन के एंटीबॉडी के लिए सकारात्मक या अनिश्चित स्क्रीनिंग परिणामों की पुष्टि।

आविष्कार का विवरण

एचआईवी संक्रमण का प्रयोगशाला निदान तीन क्षेत्रों पर आधारित है: ए) एचआईवी और उसके घटकों का संकेत; बी) एचआईवी के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना; ग) प्रतिरक्षा प्रणाली में परिवर्तन का निर्धारण। प्रयोगशाला निदान के मौजूदा तरीकों में, सीरोलॉजिकल तरीके सबसे आम हैं - वायरस एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना।

एचआईवी संक्रमण में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) और इम्युनोब्लॉटिंग (आईबी) का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है। एलिसा प्लेटों पर वायरल एंटीजन के स्थिरीकरण पर आधारित है, जो रोगी के एंटीबॉडी को बांधता है, और एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता मानव इम्युनोग्लोबुलिन जी और एम के लिए हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके लगाया जाता है। यह विधि काफी विशिष्ट और संवेदनशील है और 95% रोगियों में वायरस-विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देती है। शेष 5% मामले संक्रमण के प्रारंभिक चरण में होते हैं, जब रक्त सीरम में अभी भी कुछ एंटीबॉडी होते हैं, या रोग के अंतिम चरण में, जब शरीर तेजी से कमी के कारण एंटीबॉडी को संश्लेषित करने में सक्षम नहीं होता है। रोग प्रतिरोधक तंत्र। गलत-सकारात्मक एलिसा परिणाम भी संभव हैं, मुख्य रूप से ऑटोइम्यून और ऑन्कोलॉजिकल रोगों के रोगियों के साथ-साथ एशप्टीन-बार वायरस के कारण होने वाले संक्रमण में। इस मामले में, रूमेटोइड कारक के प्रति एंटीबॉडी की एक क्रॉस-प्रतिक्रिया होती है, एपस्टीन बार वायरसया एंटीजेनिक निर्धारक जो प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स क्लास 1 और 2 प्रोटीन (HLA-4 और DQW3) के समान हैं और एचआईवी एंटीजन से जुड़ने की क्षमता रखते हैं। गर्भवती महिलाओं और बुजुर्गों में अक्सर गलत सकारात्मक परिणाम देखे जाते हैं। हेमोलिसिस, लिपिमिया, सीरा का जीवाणु संदूषण भी अविश्वसनीय परिणामों का कारण हो सकता है।

इस संबंध में, एंटीबॉडी का पता लगाने के परिणामों की विशिष्टता का परीक्षण करने के लिए कई तरीके प्रस्तावित और उपयोग किए गए हैं। इन विधियों में से, सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली प्रतिक्रिया "वेस्टर्न ब्लॉट" के संशोधन में "प्रतिरक्षा ब्लॉट" है। विधि का सार इस प्रकार है: पहले चरण में, पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके एचआईवी प्रोटीन को आणविक भार से अलग किया जाता है। इसके बाद पॉलीएक्रिलामाइड जेल से नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली की सतह पर इलेक्ट्रोफोरेटिक स्थानांतरण होता है। इस तरह से स्थानांतरित एंटीजन को अप्रत्यक्ष विश्लेषण का उपयोग करके झिल्ली पर पता लगाया जाता है: झिल्ली को परीक्षण सामग्री के साथ ऊष्मायन किया जाता है; निहित एंटीबॉडी नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित एचआईवी एंटीजन से बंधते हैं, फिर झिल्ली स्ट्रिप्स को संयुग्म के साथ जोड़ा जाता है; जब एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, तो संयुग्म उससे जुड़ जाता है, संयुग्म से धोने और सब्सट्रेट के साथ ऊष्मायन के बाद, नाइट्रोसेल्यूलोज के उन वर्गों का धुंधलापन होता है जहां एंटीजन-एंटीबॉडी-संयुग्म परिसर का निर्माण होता है। चित्र सकारात्मक, कमजोर सकारात्मक और नकारात्मक इम्युनोब्लॉट परिणामों के उदाहरण दिखाता है।

एचआईवी-1 और एचआईवी-2 से संक्रमित व्यक्तियों के सीरम में निम्नलिखित प्रोटीन (पी) और ग्लाइकोप्रोटीन (जीपी) के प्रति एंटीबॉडी पाए जाते हैं: तालिका ए।

तालिका बी डब्ल्यूएचओ और एड्स की रोकथाम और नियंत्रण के लिए रूसी केंद्र द्वारा अनुशंसित प्रतिरक्षा सोख्ता के परिणामों का आकलन करने के लिए मानदंड प्रस्तुत करती है।

डब्ल्यूएचओ के मानदंडों के आधार पर, यदि आईबी विधि द्वारा किन्हीं दो एचआईवी-1 आवरण प्रोटीनों के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, तो सीरा को सकारात्मक माना जाता है। यदि लिफाफा प्रोटीन (जीपी160, जीपी120, जीपी41) में से केवल एक के साथ, अन्य प्रोटीन के साथ या इसके बिना प्रतिक्रिया के साथ प्रतिक्रिया होती है, तो परिणाम संदिग्ध माना जाता है। एड्स की रोकथाम और नियंत्रण के लिए रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय के संघीय वैज्ञानिक और पद्धति केंद्र के अनुसार, केवल एक कोट प्रोटीन के लिए एंटीबॉडी की उपस्थिति में भी सीरा को सकारात्मक के रूप में व्याख्या करना संभव है।

पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना सेरोकनवर्जन की शुरुआत की अवधि का संकेत दे सकता है, क्योंकि इस प्रोटीन के एंटीबॉडी सबसे पहले दिखाई देते हैं। एनवी प्रोटीन के साथ प्रतिक्रिया के बिना गैग और पोल प्रोटीन के साथ सकारात्मक प्रतिक्रियाएं प्रारंभिक सेरोकनवर्जन के चरण को प्रतिबिंबित कर सकती हैं, साथ ही एचआईवी -2 संक्रमण या एक गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया की उपस्थिति का संकेत दे सकती हैं।

एचआईवी के निदान के लिए एक विशेषज्ञ विधि के रूप में इम्युनोब्लॉटिंग के उपयोग के कई महत्वपूर्ण नुकसान हैं:

1. एचआईवी के प्रतिजन और एंटीबॉडी को एक साथ निर्धारित करने वाले परीक्षणों का उपयोग करने के मामले में एचआईवी 1 के पी 24 एंटीजन का पता लगाने की पुष्टि करने की असंभवता, जो एंटीजन और एंटीबॉडी का एक साथ पता लगाने के लिए स्क्रीनिंग परीक्षणों का उपयोग करना अनुचित (अर्थहीन) बनाती है। एचआईवी के लिए (रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय का आदेश संख्या 292 दिनांक 30.07.2001: "रक्त आधान स्टेशनों पर दाताओं की जांच करने के लिए, परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करना आवश्यक है जो एचआईवी के लिए एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों का पता लगाते हैं")।

2. केवल आईजीजी वर्ग के एंटीबॉडी का पता लगाना। तीसरी और चौथी पीढ़ी के परीक्षणों (आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाना) का उपयोग करके प्राप्त सकारात्मक परिणामों की पूरी तरह से पुष्टि करना असंभव है।

3. परीक्षण स्कोर की व्याख्या की व्यक्तिपरकता, विशेष रूप से "संदिग्ध" और "अनिश्चित" परिणामों के मामलों में और शुरुआती अवस्थासेरोकनवर्जन (इन मामलों में नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर पता लगाने योग्य बैंड धुंधले होते हैं, नग्न आंखों से मुश्किल से दिखाई देते हैं, और विभिन्न लोगों द्वारा मूल्यांकन किए जाने पर अक्सर असहमति होती है)।

4. विश्लेषण के परिणामों के स्वचालित मात्रात्मक मूल्यांकन की असंभवता।

5. एलिसा की तुलना में कम संवेदनशीलता।

6. भंडारण की नाजुकता (भंडारण के दौरान, नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली की पट्टियां फीकी पड़ जाती हैं और विवादास्पद मामलों में एचआईवी का पता लगाने या न लगाने की वस्तुनिष्ठ पुष्टि नहीं हो सकती है)।

7. प्रतिक्रिया और भंडारण स्थापित करने में कठिनाई (नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली स्ट्रिप्स बहुत नाजुक होती हैं और अक्सर टूट जाती हैं)।

8. आईएस किट की ऊंची कीमत.

ज्ञात अभिकर्मक, जो एचआईवी सहित एक ही रोगज़नक़ के लिए एंटीजन और एंटीबॉडी के एक साथ निर्धारण के लिए एक किट है (DE 4236189 F1, 28.04.1994)। हालाँकि, एक परीक्षण प्रणाली का खुलासा नहीं किया गया है जो विभिन्न चरणों में एचआईवी संक्रमण का निदान करने की अनुमति देता है।

वर्तमान आविष्कार का उद्देश्य एक परीक्षण प्रणाली प्राप्त करना है जिसके साथ एक साथ पता लगाने के लिए परीक्षणों का उपयोग करके एचआईवी 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ और एचआईवी 1 पी 24 एंटीजन के एंटीबॉडी के लिए स्क्रीनिंग परीक्षणों के सकारात्मक या संदिग्ध परिणामों की पुष्टि करना संभव है। एंटीजन और एंटीबॉडी.

प्रस्तावित तकनीकी समाधान पहले और दूसरे प्रकार के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी), समूह ओ के पहले प्रकार और मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के लिए पी 24 एंटीजन का पता लगाने के लिए एंटीबॉडी के स्पेक्ट्रम की पहचान करने के लिए एक एंजाइम इम्यूनोएसे परीक्षण प्रणाली द्वारा प्राप्त किया जाता है। पहले प्रकार के पी24 की विशेषता यह है कि इसमें मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एंटीजन पर आधारित एक इम्युनोसॉरबेंट शामिल है, जो जीपी41 (एनवी एचआईवी-1 और एचआईवी-2 समूह ओ), जीपी120 (एनवी), पी24 (गैग), पी31 (पोल) हैं। , जीपी36 (एनवी एचआईवी-2), एचआईवी एंटीजन 1 पी24 के प्रति एंटीबॉडी, और पता लगाने वाले अभिकर्मक, जिसमें उपरोक्त एचआईवी एंटीजन और एचआईवी एंटीबॉडी को एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए प्लेटों के विभिन्न कुओं में सोख लिया जाता है।

इसके अलावा, एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टीरीन बंधने योग्य या गैर-बंधनेवाला प्लेटों का उपयोग सोर्शन के लिए किया जाता है।

वर्तमान आविष्कार द्वारा प्राप्त तकनीकी परिणाम एचआईवी 1 और 2, एचआईवी 1 समूह ओ और एचआईवी 1 पी 24 एंटीजन, उच्च संवेदनशीलता, परिणामों की स्वचालित व्याख्या की संभावना के लिए एंटीबॉडी के सकारात्मक परिणामों की पुष्टि करने की संभावना है, जो व्यक्तिपरकता को समाप्त करता है। मूल्यांकन, परीक्षण करने में आसानी, मौजूदा लागत आईएस सेट से कम है।

यह तकनीकी समाधान ज्ञात से भिन्न है:

1. प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं के लिए एक ठोस चरण वाहक प्लेट के रूप में उपयोग करें।

2. एक शर्बत के रूप में पी 24 एचआईवी और एचआईवी एंटीजन के एक सेट के लिए एंटीबॉडी का एक साथ उपयोग।

आविष्कार को निम्नलिखित उदाहरण से दर्शाया गया है।

विकसित परीक्षण प्रणाली "डीएस-आईएफए-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम + एजी पी24 एचआईवी 1" के सक्रिय सिद्धांत हैं:

इम्यूनोसॉर्बेंट - एचआईवी-1 संरचनात्मक प्रोटीन के समान पुनः संयोजक एंटीजन: जीपी41 (एनवी एचआईवी-1 और एचआईवी 1 समूह ओ), जीपी120 (एनवी), पी24 (गैग), पी31 (पोल), एचआईवी-2: जीपी36 (एनवी) और मोनोक्लोनल एचआईवी 1(पी24) एंटीजन के प्रति माउस एंटीबॉडी को पॉलीस्टाइरीन कोलैप्सिबल प्लेट की पट्टियों पर अलग से अधिशोषित किया जाता है।

इम्यूनोसॉर्बेंट उपयोग की तैयारी के लिए:

1. एचआईवी-1 जीपी41 ई. कोली स्ट्रेन नंबर एएचआईवी 103 द्वारा निर्मित एक प्रोटीन है।

2. HIV-1 gp120 एक प्रोटीन है जो ई. कोली स्ट्रेन नंबर AHIV 109 द्वारा निर्मित होता है।

3. एचआईवी-1 पी24 - ई. कोली स्ट्रेन नंबर एएचआईवी 105 द्वारा उत्पादित प्रोटीन।

4. एचआईवी-1 पी31 - ई. कोली स्ट्रेन नंबर एएचआईवी 108 द्वारा उत्पादित प्रोटीन।

5. एचआईवी-2 पी36 - ई. कोली स्ट्रेन नंबर एएचआईवी 106 द्वारा उत्पादित प्रोटीन।

एचआईवी1 पी24 एंटीजन के लिए संयुग्मित 1, लियोफिलाइज्ड या तरल, माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, बायोटिन के साथ संयुग्मित।

1. संयुग्म 2, लियोफिलिज्ड या तरल, एचआईवी-1 के संरचनात्मक प्रोटीन के समान पुनः संयोजक एंटीजन का मिश्रण: जीपी41 (एनवी एचआईवी-1 और एचआईवी 1 समूह ओ), जीपी120 (एनवी), पी24 (गैग), पी31 (पीओ1) ); एचआईवी-2: जीपी36 (एनवी) बायोटिन के साथ संयुग्मित;

2. संयुग्म 3, 4 - लियोफिलिज्ड या तरल - हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के साथ लेबल किया गया स्ट्रेप्टाविडिन;

प्रारंभिक अध्ययन के दौरान, परीक्षण प्रणाली का डिज़ाइन चुना गया, इसके घटकों को तैयार करने की तकनीक पर काम किया गया, और एंजाइम इम्यूनोएसे के संचालन के लिए स्थितियों को अनुकूलित किया गया।

परीक्षण प्रणाली "डीएस - एलिसा - एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम + एजी पी 24 एचआईवी 1" में एलिसा स्थापित करते समय, संयुग्म -1 के 25 μl को पी 24 में सोखने वाले एंटीबॉडी के साथ प्लेट के कुओं में जोड़ा जाता है, और अधिशोषित एंटीजन वाले कुएं - 25 μl संयुग्म-2। प्रतिक्रिया योजना नीचे दिखाई गई है. इसके बाद, परीक्षण नमूने का 25 μl प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है। इसी समय, एंटीजन वाले कुएं में, रंग नारंगी से गुलाबी हो जाता है, और एंटीबॉडी वाले कुएं में, हरे से भूरे रंग में बदल जाता है। मिश्रण को शेकर पर 37°C पर 45 मिनट के लिए (या थर्मोस्टेट में 37°C पर 1 घंटा) रखा जाता है। फिर, बिना धोए, पी24 एंटीजन निर्धारित करने के लिए टैबलेट के कुओं में 50 μl संयुग्म -3 जोड़ा जाता है, और एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए 50 μl संयुग्म -4 जोड़ा जाता है। एक शेकर पर 37°C पर 20 मिनट (या थर्मोस्टेट में 37°C पर 30 मिनट) तक ऊष्मायन के बाद, प्लेट को धोया जाता है और सब्सट्रेट मिश्रण के साथ विकसित किया जाता है। कुल प्रतिक्रिया समय 1 घंटा 25 मिनट (या 1 घंटा 50 मिनट)। परीक्षण नमूने में मौजूद पी24 एंटीजन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को पी24 से बांधता है, और विशिष्ट एंटीबॉडी प्लेट पर पुनः संयोजक एंटीजन के साथ एक कॉम्प्लेक्स बनाते हैं। पी24 के साथ परिणामी प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स एंटी-पी24 का पता एंटी-पी24-बायोटिन संयुग्म के साथ लगाया जाता है, फिर स्ट्रेप्टाविडिन-पेरोक्सीडेज के साथ, और एटी-एचआईवी के साथ एजी-एचआईवी के प्रतिरक्षा परिसरों का पता एजी-बायोटिन संयुग्म के साथ, फिर स्ट्रेप्टाविडिन-पेरोक्सीडेज के साथ लगाया जाता है। .

प्रतिक्रिया स्थापित करने की योजना.

परिणामों का लेखांकन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से दो तरंग दैर्ध्य पर किया जाता है: 450 /620-680 एनएम, उपकरण को "वायु" पर सेट करके। आइए 450 एनएम की एक तरंग दैर्ध्य पर परिणामों को ध्यान में रखें।

विश्लेषण के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है यदि K- वाले कुओं में ऑप्टिकल घनत्व (OD) का औसत मान 0.2 से अधिक नहीं है, K+ वाले कुओं में - 1.0 से कम नहीं है। ओपी आलोचक. सूत्र द्वारा गणना:

ओपी आलोचक. जीपी41 = सीएफ. कीमत ओपी के-(जीपी41)+0.15

ओपी आलोचक. जीपी120 = सीएफ. कीमत ओपी के-(जीपी120)+0.15

ओपी आलोचक. पी24 = सीएफ. कीमत ओपी के-(आर24)+0.15

ओपी आलोचक. पी31 = सीएफ. कीमत ओपी के-(आर31)+0.15

ओपी आलोचक. जीपी36 = सीएफ. कीमत ओपी के-(जीपी36)+0.15

ओपी आलोचक. एजी पी24 = सीएफ. कीमत ओडी से- (एजी पी24)+0.04

जहां 0.15 और 0.04 निर्माता पर सांख्यिकीय प्रसंस्करण की विधि द्वारा स्थापित गुणांक हैं। परीक्षण प्रणाली विकसित करने की प्रक्रिया में, निम्नलिखित का उपयोग किया गया:

1. स्वस्थ दाताओं से रक्त सीरम के नमूने (n=610)।

2. विभिन्न रोगियों से रक्त सीरम के नमूने संक्रामक रोगएचआईवी से संबद्ध नहीं (एआरआई, निमोनिया, टॉन्सिलिटिस, हर्पेटिक और साइटोमेगालोवायरस संक्रमण, सिफलिस, क्लैमाइडिया, वायरल हेपेटाइटिसए, बी और सी (एन=224))।

3. विभिन्न गैर-संचारी रोगों वाले रोगियों के रक्त सीरम के नमूने - चोटें, हृदय प्रणाली के रोग, ऑन्कोलॉजी (एन = 35)।

4. गर्भवती महिलाओं के रक्त सीरम के नमूने (n=40)।

5. रक्त सीरम के नमूने, एलिसा में सेरोपॉजिटिव और इम्युनोब्लॉट (एन = 428) में पुष्टि की गई।

6. एचआईवी 1,2 एंटीबॉडी और पी24 एंटीजन के एक साथ निर्धारण और एक अनिश्चित इम्युनोब्लॉट परिणाम (एन = 123) के लिए एंजाइम इम्यूनोएसे परीक्षण प्रणालियों में प्राप्त सकारात्मक परिणाम वाले सीरम नमूने।

7. सीरा का आंतरिक पैनल जिसमें एचआईवी 1.2 के एंटीबॉडी शामिल हैं और नहीं हैं, रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय और इम्युनोब्लॉट (एन = 21) द्वारा पंजीकृत एंजाइम इम्यूनोएसेज़ पर परीक्षण किया गया है।

8. मानक "एचआईवी 1 एंटीजन मानक", "बायो रेड", फ़्रांस, बिल्ली। नंबर 72217, जो एक वायरल लाइसेट से प्राप्त एंटीजन है।

9. उद्यम का आंतरिक मानक। 200 पीजी/एमएल की सांद्रता पर पी 24 एंटीजन युक्त एक नमूना, एक वायरल लाइसेट से प्राप्त किया गया और "एचआईवी 1 एंटीजन मानक" कंपनी "बायो रेड", फ्रांस, बिल्ली के अनुसार शीर्षक दिया गया। क्रमांक 72217.

10. पहले प्रकार (एचआईवी 1) के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के एंटीबॉडी युक्त सीरा का मानक पैनल - ओएसओ 42-28-212-93-02पी, मेडिको-बायोलॉजिकल यूनियन, नोवोसिबिर्स्क।

11. दूसरे प्रकार (एचआईवी 2) के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के एंटीबॉडी युक्त सीरा का मानक पैनल - ओएसओ-42-28-216-02पी, मेडिको-बायोलॉजिकल यूनियन, नोवोसिबिर्स्क।

12. सीरा का मानक पैनल जिसमें पहले प्रकार और दूसरे (एचआईवी 1, 2) के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के एंटीबॉडी नहीं होते हैं - ओएसओ-42-28-214-94-02पी, मेडिको-बायोलॉजिकल यूनियन, नोवोसिबिर्स्क।

पी24 एंटीजन का पता लगाने के लिए परीक्षण प्रणाली की संवेदनशीलता का मूल्यांकन मानक "एचआईवी आई एंटीजन मानक", "बीआईओ रेड", उद्यम के आंतरिक मानक का उपयोग करके किया गया था। आंतरिक मानक का उपयोग करते हुए, 40 पीजी/एमएल से 5 पीजी/एमएल तक लगातार 4 2-गुना तनुकरण एचआईवी 1, 2 के एंटीबॉडी से मुक्त सामान्य दाता प्लाज्मा के साथ एक मंदक के रूप में तैयार किए गए थे। पता लगाने योग्य एंटीजन की सबसे छोटी मात्रा को संवेदनशीलता मानदंड के रूप में लिया गया था। प्राप्त डेटा तालिका 1 में प्रस्तुत किया गया है।

विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए परीक्षण प्रणाली की संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए, मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी 1, 2) के एंटीबॉडी वाले नमूनों के मानक पैनल का उपयोग किया गया था (ओएसओ 42-28-212-93-02पी पी.012, ओएसओ 42-28-216- 02पी (एचआईवी 2) पृ.003)।

प्राप्त आंकड़े तालिका 3, 4 में प्रस्तुत किए गए हैं।

परीक्षण प्रणाली "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" की नैदानिक ​​दक्षता की तुलना परीक्षण प्रणाली "जेन्सक्रिन-एचआईवी-एजी/एम" (बायो-रेड), "डीआईए-एचआईवी" से की गई थी। 1 /2" (डायप्रोफ-मेड), "वाइरोनोस्टिक्स ऑफ एचआईवी यूनिफॉर्म II एजी/एम" (बायोमेरिओक्स), "रीकॉम्बिनेंट-एचआईवी1.2 डीएसएम" (एमबीएस), "अमेरकार्ड एंटी-एचआईवी-1.2 के" (अमेरकार्ड), " एचआईवी-1, एचआईवी-2-एलिसा-एविसेना" (एविसेना)। इस प्रयोजन के लिए, सभी संकेतित परीक्षणों में आंतरिक पैनल से सीरम के नमूनों का परीक्षण किया गया। तालिका 5 में प्रस्तुत परिणाम "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" की उच्च नैदानिक ​​दक्षता दर्शाते हैं।

परीक्षण प्रणाली "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" का संवेदनशीलता अध्ययन भी इम्यूनोब्लॉट में एचआईवी पॉजिटिव के रूप में पुष्टि किए गए रोगियों के रक्त सीरा के साथ किया गया था। इन सीरा के कुल 428 नमूनों का परीक्षण किया गया। विभिन्न एचआईवी प्रोटीन और पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कई विकल्प प्राप्त किए गए हैं। परिणाम तालिका 6 में प्रस्तुत किए गए हैं।

तालिका 6 एचआईवी 1 पॉजिटिव सीरा (एन = 428) का परीक्षण करते समय विभिन्न एचआईवी 1 प्रोटीन और पी 24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के परिणाम
% पता लगाना	प्रोटीन प्रोफ़ाइल
	विरोधी GR41	विरोधी GR120	विरोधी r24	विरोधी r31	पी 24
51,1%	+	+	+	+	-
35,3%	+	-	+	+	-
4%	+	-	+	-	-
3,3%	+	-	-	+	-
1,4%	+	-	-	+	+
1,2%	+	+	+	+	+
1,2%	+	+	-	+	+
0,9%	+	-	+	+	+
0,7%	+	-	+	-	+
0,5%	+	-	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	-
व्यक्तिगत प्रोटीन या एजी पी24 के प्रति एंटीबॉडी का % पता लगाना	100%	53,9%	93,2%	94,4%	6,1%

एचआईवी 1 पॉजिटिव नमूनों का परीक्षण करते समय, 3% सीरा ने जीपी36 (एनवी एचआईवी 2) के साथ सकारात्मक प्रतिक्रिया दिखाई। एमपी/ओपीक्रिट इन नमूनों में 2.0 से अधिक नहीं था. एचआईवी 1 (जीपी41) और एचआईवी 2 (जीपी36) के बाहरी आवरण प्रोटीन की क्रॉस रिएक्टिविटी पर हमारा डेटा साहित्य डेटा के अनुरूप है।

परिणामों की व्याख्या

"डीएस-आईएफए-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" में मानक और आंतरिक पैनलों से एचआईवी पॉजिटिव सीरा और नमूनों के परीक्षण के विश्लेषण ने इस परीक्षण के परिणामों की व्याख्या के लिए मानदंड विकसित करना संभव बना दिया। अनुशंसित मानदंड तालिका 7 में दिखाए गए हैं।

इन मानदंडों के आधार पर, सभी एचआईवी पॉजिटिव सीरा नमूनों (एन=428) की पहचान "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी1" में पॉजिटिव के रूप में की गई। एचआईवी 1 के प्रति एंटीबॉडी वाले मानक पैनल के 16 नमूनों में से 14 को सकारात्मक और 2 को अनिश्चित के रूप में निर्धारित किया गया था। एचआईवी 2 के प्रतिरक्षी वाले मानक पैनल के सभी 8 नमूने सकारात्मक पाए गए। एचआईवी 1 के प्रति एंटीबॉडी वाले आंतरिक पैनल के 10 नमूनों में से 7 को सकारात्मक और 3 को अनिश्चित के रूप में पहचाना गया।

परीक्षण प्रणाली "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम + एजीआर 24 एचआईवी 1" का संवेदनशीलता अध्ययन भी एंजाइम इम्यूनोएसे परीक्षण प्रणालियों में सकारात्मक परिणाम वाले रोगियों के रक्त सीरा के साथ किया गया था जो एक साथ एंटीबॉडी और पी 24 एंटीजन का पता लगाता है। और इम्युनोब्लॉट में अनिश्चित। ऐसे कुल 123 नमूनों का परीक्षण किया गया। डेटा तालिका 8 में प्रस्तुत किया गया है।

जब "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" में अनिश्चित इम्युनोब्लॉट परिणाम (एन = 123) के साथ सीरा का परीक्षण किया गया, तो 72 नमूनों (58.5%) ने सकारात्मक परिणाम दिखाया। इनमें से 26 सीरा (21.1%) केवल पी24 के लिए सकारात्मक हैं, 20 (16.3%) - केवल एंटीबॉडी के लिए, 16 (13%) - किसी एक प्रोटीन के एंटीबॉडी के साथ पी24 के लिए, 10 (8.1%) - पी24 के लिए दो या दो से अधिक प्रोटीनों के प्रति एंटीबॉडी। इस प्रकार, अकेले एंटीबॉडी के परीक्षण (पी24 का कोई पता नहीं) के परिणामस्वरूप 30 नमूने (24.4%) सकारात्मक होंगे। परीक्षण में पी24 एंटीजन का पता चलने से अतिरिक्त 42 नमूनों (34.1%) को सकारात्मक निर्धारित करना संभव हो गया।

परीक्षण प्रणाली की विशिष्टता का आकलन करने के लिए, एचआईवी 1, 2 (एन = 20) के लिए कोई एंटीबॉडी युक्त सीरा का एक मानक पैनल का उपयोग किया गया था; स्वस्थ दाताओं से रक्त सीरम के नमूने (एन = 610), विभिन्न संक्रामक रोगों वाले रोगियों से रक्त सीरम के नमूने (एन = 224) जो एचआईवी से जुड़े नहीं हैं; विभिन्न गैर-संचारी रोगों वाले रोगियों के रक्त सीरम के नमूने - चोटें, हृदय प्रणाली के रोग, ऑन्कोलॉजी (एन=35); गर्भवती महिलाओं के रक्त सीरम के नमूने (n=40)। कुल 929 नमूनों का परीक्षण किया गया। स्वस्थ दाताओं के रक्त सीरा के एक नमूने ने गलत सकारात्मक परिणाम दिखाया - जीपी41 और पी24 के प्रति एंटीबॉडी का पता चला। स्वस्थ दाताओं से रक्त सीरा के 7 नमूने और एचआईवी से संबंधित संक्रामक रोगों वाले रोगियों से रक्त सीरा के 2 नमूनों ने पी 24 के लिए गलत सकारात्मक परिणाम दिखाया।

परीक्षण प्रणाली की विशिष्टता का आकलन करने के लिए, नकारात्मक नमूनों के एक मानक पैनल का उपयोग किया गया था (ओएसओ 42-28-214-94-02पी, पृष्ठ 009)। विशिष्टता 100% थी.

इस प्रकार, किए गए अध्ययनों से पता चला है कि परीक्षण प्रणाली "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" की विशिष्टता सामान्य दाताओं और विभिन्न संक्रामक रोगियों के रक्त सीरम नमूनों के अध्ययन में 99% है। और दैहिक रोग.

प्राप्त आंकड़े विकसित परीक्षण प्रणाली "डीएस-एलिसा-एंटी-एचआईवी 1,2-स्पेक्ट्रम+एजीआर24 एचआईवी 1" की उच्च नैदानिक ​​दक्षता दर्शाते हैं। परीक्षण प्रणाली का उपयोग एचआईवी प्रकार 1 और 2 के व्यक्तिगत प्रोटीन और एचआईवी1 पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जा सकता है ताकि एंटीबॉडी का पता लगाने वाली परीक्षण प्रणालियों के साथ सकारात्मक स्क्रीनिंग परिणाम की पुष्टि की जा सके, या परीक्षण प्रणाली जो एक साथ एंटीबॉडी और एचआईवी1 पी24 एंटीजन का पता लगा सके। परीक्षण प्रणाली का उपयोग सकारात्मक परिणामों की पुष्टि करने के लिए वैकल्पिक इम्युनोब्लॉट परीक्षण के रूप में किया जा सकता है, साथ ही एचआईवी और पी24 एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है। विभिन्न चरणसंक्रमण.

परीक्षण के लाभ

1. पुष्टिकारक एंजाइम इम्यूनोएसे प्लेट प्रारूप

2. एचआईवी 1, 2 एंटीबॉडी स्पेक्ट्रम और एचआईवी 1 पी24 एंटीजन का संयोजन पुष्टिकरण परीक्षण

3. सभी आईजी वर्गों के एंटीबॉडी का पता लगाना

4. पी24 का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता 5 पीजी/एमएल से कम नहीं है

5. इम्युनोब्लॉट की तुलना में अनिश्चित परिणामों को कम करता है

6. विश्लेषण समय - 1 घंटा 25 मिनट (इम्यूनोब्लॉट - 3 से 20 घंटे तक)

7. सभी घटकों और नमूनों की शुरूआत का दृश्य मूल्यांकन।

1. पहले और दूसरे प्रकार के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी) के एंटीबॉडी के स्पेक्ट्रम की पहचान करने के लिए एलिसा परीक्षण प्रणाली, पहले प्रकार के समूह ओ और पहले प्रकार के पी24 के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस के लिए पी24 एंटीजन का पता लगाने के लिए एलिसा परीक्षण प्रणाली। इसकी विशेषता यह है कि इसमें इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस एंटीजन gp41 (env HIV-1 और HIV-2 समूह O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), एंटीबॉडीज पर आधारित एक इम्युनोसॉरबेंट शामिल है। एचआईवी एंटीजन 1 पी24, और अभिकर्मकों का पता लगाना, जबकि उपरोक्त एचआईवी एंटीजन और एचआईवी एंटीबॉडी को एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए प्लेटों के विभिन्न कुओं में सोख लिया जाता है।

2. दावा 1 के अनुसार एलिसा परीक्षण प्रणाली, इसकी विशेषता यह है कि एंजाइम इम्यूनोएसे के लिए 96-वेल पॉलीस्टीरीन बंधने योग्य या गैर-बंधनेवाला प्लेटों का उपयोग सोर्शन के लिए किया जाता है।