Combibesti testi kasutamine HIV diagnoosimisel. HIV-nakkuse diagnoosimise kaasaegsed meetodid Video: kaasaegne ensüümi immuunanalüüs

HIV-nakkuse õigeaegne diagnoosimine muutub äärmiselt oluliseks meetmeks, kuna varasem ravi võib suuresti määrata haiguse edasise arengu ja pikendada patsiendi eluiga. Viimastel aastatel on selle kohutava haiguse avastamise vallas tehtud märkimisväärseid edusamme: vanad testimissüsteemid asendatakse arenenumatega, uurimismeetodid muutuvad kättesaadavamaks ja nende täpsus on oluliselt suurenenud.

Selles artiklis räägime kaasaegsetest HIV-nakkuse diagnoosimise meetoditest, mida on kasulik teada selle probleemi õigeaegseks raviks ja patsiendi normaalse elukvaliteedi säilitamiseks.

HIV-i diagnoosimise meetodid

Venemaal viiakse HIV-nakkuse diagnoosimiseks läbi standardprotseduur, mis hõlmab kahte taset:

ELISA testisüsteem (sõelanalüüs);
immuunblotanalüüs (IB).

Kasutada võib ka muid diagnostilisi meetodeid:

ekspresstestid.

ELISA testisüsteemid

Diagnoosimise esimeses etapis kasutatakse HIV-nakkuse tuvastamiseks skriiningtesti (ELISA), mis põhineb laborites loodud HIV-valkudel, mis püüavad kinni infektsioonile vastuseks organismis toodetud spetsiifilised antikehad. Pärast nende interaktsiooni katsesüsteemi reagentidega (ensüümidega) muutub indikaatori värvus. Lisaks töödeldakse neid värvimuutusi spetsiaalsel seadmel, mis määrab tehtud analüüsi tulemuse.

Sellised ELISA testid näitavad tulemusi mõne nädala jooksul pärast HIV-nakkuse sissetoomist. See analüüs ei määra viiruse olemasolu, vaid tuvastab selle vastaste antikehade tekke. Mõnikord algab HIV-vastaste antikehade tootmine inimkehas 2 nädalat pärast nakatumist, kuid enamikul inimestel tekivad need hiljem, 3-6 nädala pärast.

Erineva tundlikkusega ELISA teste on neli põlvkonda. Viimastel aastatel on sagedamini kasutusele võetud III ja IV põlvkonna testimissüsteemid, mis põhinevad sünteetilistel peptiididel või rekombinantsetel valkudel ning on suurema spetsiifilisuse ja täpsusega. Neid saab kasutada HIV-nakkuse diagnoosimiseks, HIV levimuse jälgimiseks ja ohutuse tagamiseks annetatud vere testimisel. III ja IV põlvkonna ELISA testisüsteemide täpsus on 93-99% (riikides toodetakse tundlikumaid teste Lääne-Euroopa – 99%).

ELISA testi tegemiseks võetakse patsiendi veenist 5 ml verd. Viimase söögikorra ja analüüsi vahel peaks olema vähemalt 8 tundi (reeglina tehakse seda hommikul tühja kõhuga). Sellist testi soovitatakse teha mitte varem kui 3 nädalat pärast väidetavat nakatumist (näiteks pärast kaitsmata vahekorda uue seksuaalpartneriga).

ELISA testi tulemused saadakse 2-10 päeva pärast:

negatiivne tulemus: näitab HIV-nakkuse puudumist ja ei nõua eriarsti suunamist;
valenegatiivne tulemus: võib täheldada nakkuse varases staadiumis (kuni 3 nädalat), AIDSi hilisemates staadiumides koos raske immuunsupressiooni ja ebaõige vere ettevalmistamisega;
valepositiivne tulemus: võib täheldada mõne haiguse ja vale vere ettevalmistamise korral;
positiivne tulemus: viitab HIV-infektsiooniga nakatumisele, nõuab IB-d ja patsiendi suunamist AIDS-i keskuse eriarsti vastuvõtule.

Miks võib ELISA test anda valepositiivseid tulemusi?

ELISA-testi HIV-testi valepositiivseid tulemusi võib täheldada vale veretöötluse või selliste seisundite ja haigustega patsientidel:

hulgimüeloom;
Epsteini-Barri viiruse põhjustatud nakkushaigused;
olek pärast ;
autoimmuunhaigused;
raseduse taustal;
seisund pärast vaktsineerimist.

Ülalkirjeldatud põhjustel võib veres esineda mittespetsiifilisi ristreageerivaid antikehi, mille teket HIV-nakkus ei kutsunud esile.

Viimastel aastatel on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud tänu III ja IV põlvkonna testsüsteemide kasutamisele, mis sisaldavad tundlikumaid peptiid- ja rekombinantseid valke (need sünteesitakse in vitro geenitehnoloogia abil). Pärast selliste ELISA testide kasutamist on valepositiivsete tulemuste sagedus oluliselt vähenenud ja on umbes 0,02-0,5%.

Valepositiivne tulemus ei tähenda, et inimene on HIV-i nakatunud. Sellistel juhtudel soovitab WHO teist ELISA testi (kohustuslik IV põlvkond).

Patsiendi veri saadetakse referent- või arbitraažilaborisse, millel on märge "korda" ja seda testitakse IV põlvkonna ELISA testisüsteemiga. Kui uue analüüsi tulemus on negatiivne, tunnistatakse esimene tulemus ekslikuks (valepositiivne) ja IB-d ei tehta. Kui teise testi tulemus on positiivne või kaheldav, peab patsient HIV-nakkuse kinnitamiseks või ümberlükkamiseks läbima IB 4-6 nädala pärast.

immuunbloteerimine

HIV-nakkuse lõplikku diagnoosi saab teha alles pärast positiivse immuunblotanalüüsi (IB) tulemuse saamist. Selle rakendamiseks kasutatakse nitrotselluloosi riba, millele kantakse viirusvalgud.

IB vereproovid võetakse veenist. Seejärel töödeldakse seda spetsiaalselt ja selle seerumis sisalduvad valgud eraldatakse spetsiaalses geelis vastavalt nende laengule ja molekulmassile (manipulatsioon toimub spetsiaalsel seadmel elektrivälja mõjul). Vereseerumi geelile kantakse nitrotselluloosi riba ja spetsiaalses kambris tehakse blotimine (“bloteerimine”). Riba töödeldakse ja kui kasutatud materjalid sisaldavad HIV-vastaseid antikehi, seostuvad need IB antigeensete ribadega ja kuvatakse joontena.

IB loetakse positiivseks, kui:

Ameerika CDC kriteeriumide järgi - ribal on kaks või kolm rida gp41, p24, gp120 / gp160;
Ameerika FDA kriteeriumide kohaselt - ribal on kaks rida p24, p31 ja rida gp41 või gp120 / gp160.

99,9% juhtudest viitab positiivne IB tulemus HIV-nakkusele.

Ridade puudumisel on IB negatiivne.

Liinide tuvastamisel gp160, gp120 ja gp41-ga on IB kaheldav. Sellist tulemust saab tuvastada, kui:

onkoloogilised haigused;
Rasedus;
sagedased vereülekanded.

Sellistel juhtudel on soovitatav läbi viia teine uuring, kasutades teise ettevõtte komplekti. Kui pärast täiendavat IB-d jääb tulemus kahtlane, siis on vajalik järelkontroll kuus kuud (IB tehakse iga 3 kuu järel).

polümeraasi ahelreaktsioon

PCR-testiga saab tuvastada viiruse RNA-d. Selle tundlikkus on üsna kõrge ja võimaldab tuvastada HIV-nakkuse juba 10 päeva pärast nakatumist. Mõnel juhul võib PCR anda valepositiivseid tulemusi, kuna selle kõrge tundlikkus võib reageerida ka teiste infektsioonide antikehadele.

See diagnostikameetod on kallis, nõuab spetsiaalset varustust ja kõrgelt kvalifitseeritud spetsialiste. Need põhjused ei võimalda seda populatsiooni massilise testimise ajal läbi viia.

PCR-i kasutatakse järgmistel juhtudel:

HIV avastamiseks vastsündinutel, kes on sündinud HIV-nakkusega emadele;
HIV tuvastamiseks "aknaperioodil" või kahtlase IB korral;
kontrollida HIV kontsentratsiooni veres;
doonorivere uurimiseks.

Ainult PCR-testiga HIV-i diagnoosi ei panda, vaid see tehakse nii täiendav meetod diagnostika vaidluste lahendamiseks.

Ekspressmeetodid

HIV-diagnostika üheks uuenduseks on saanud kiirtestid, mille tulemusi saab hinnata 10-15 minutiga. Kõige tõhusamad ja täpsemad tulemused saadakse kapillaaride voolu põhimõttel põhinevate immunokromatograafiliste testidega. Need on spetsiaalsed ribad, millele kantakse verd või muid uuritavaid vedelikke (sülg, uriin). HIV-vastaste antikehade olemasolul ilmub 10-15 minuti pärast testile värviline kontrollriba - positiivne tulemus. Kui tulemus on negatiivne, kuvatakse ainult kontrolljoon.

Nagu ELISA testide puhul, tuleb kiirtesti tulemusi kinnitada IB analüüsiga. Alles pärast seda saab määrata HIV-nakkuse diagnoosi.

Koduseks testimiseks on olemas kiirkomplektid. OraSure Technologies1 (USA) test on FDA poolt heaks kiidetud, saadaval ilma retseptita ja seda saab kasutada HIV tuvastamiseks. Pärast testi, positiivse tulemuse korral, soovitatakse patsiendil diagnoosi kinnitamiseks läbida uuring spetsialiseeritud keskuses.

Ülejäänud koduseks kasutamiseks mõeldud teste ei ole FDA veel heaks kiitnud ja nende tulemused võivad olla väga küsitavad.

Hoolimata asjaolust, et kiirtestid on IV põlvkonna ELISA testidest madalama täpsusega, kasutatakse neid laialdaselt elanikkonna täiendavaks testimiseks.

HIV-nakkuse testi saate teha igas polikliinikus, Regionaalhaiglas või AIDSi spetsialiseeritud keskustes. Venemaa territooriumil hoitakse neid täiesti konfidentsiaalselt või anonüümselt. Iga patsient võib enne või pärast analüüsi oodata meditsiinilist või psühholoogilist nõu. HIV-testide eest peate maksma ainult kaubanduslikes meditsiiniasutustes ning avalikes kliinikutes ja haiglates tehakse neid tasuta.

Lisateavet selle kohta, kuidas võite saada HIV-nakkuse ja millised müüdid levivad nakatumisvõimaluste kohta, lugege

Üldine teave uuringu kohta

HIV (inimese immuunpuudulikkuse viirus) on retroviiruste perekonda kuuluv viirus, mis nakatab rakke immuunsussüsteem inimesel (CD4, T-abistajad). Põhjustab AIDS-i.

HIV-1 on kõige levinum viiruse tüüp, mida leidub kõige sagedamini Venemaal, USA-s, Euroopas, Jaapanis ja Austraalias (tavaliselt alatüüp B).

HIV-2 on haruldane tüüp, levinud Lääne-Aafrikas.

Inimese immuunpuudulikkuse viiruse diagnoosimisel kasutatakse kombineeritud neljanda põlvkonna testimissüsteemi, mis suudab tuvastada HIV-nakkuse juba 2 nädalat pärast viiruse sattumist verre, samas kui esimese põlvkonna testsüsteemid teevad seda alles 6-12 nädala pärast. pärast nakatumist.

Selle kombineeritud HIV testi eeliseks on, et tänu HIV-1 p24 vastaste antikehade kasutamisele reagentidena tuvastatakse spetsiifiline p24 antigeen (viiruse kapsiidivalk), mida saab selle testiga tuvastada juba 1-4 nädalat pärast nakatumist. st isegi enne serokonversiooni, mis vähendab oluliselt "akna perioodi".

Lisaks tuvastab selline HIV-test verest HIV-1 ja HIV-2 vastaseid antikehi (kasutades antigeen-antikeha reaktsiooni), mida toodetakse piisavas koguses, et testimissüsteem saaks määrata 2-8 nädala pärast alates hetkest. infektsioonist.

Pärast serokonversiooni hakkavad antikehad seostuma p24 antigeeniga, mille tulemuseks on positiivne HIV antikehade test ja negatiivne p24 test. Kuid mõne aja pärast tuvastatakse veres korraga nii antikehad kui ka antigeen. Lõplikus staadiumis võib HIV-i antikehade AIDSi test anda negatiivse tulemuse, kuna antikehade tootmise mehhanism on häiritud.

HIV-nakkuse etapid

Inkubatsiooniperiood ehk “seronegatiivse akna periood” on aeg nakatumise hetkest kuni viiruse vastaste kaitsvate antikehade tekkeni veres, mil HIV-antikehade testid on negatiivsed, kuid inimene võib juba viirust edasi kanda. teised inimesed. Selle perioodi kestus on 2 nädalat kuni 6 kuud.
Äge periood HIV-nakkus tekib keskmiselt 2-4 nädalat pärast nakatumist ja kestab ligikaudu 2-3 nädalat. Selles etapis võivad mõnedel inimestel viiruse aktiivse replikatsiooni tõttu tekkida mittespetsiifilised gripilaadsed sümptomid.
Varjatud staadium on asümptomaatiline, kuid selle käigus väheneb järk-järgult immuunsus ja suureneb viiruse hulk veres.
AIDS (omandatud immuunpuudulikkuse sündroom) on HIV-nakkuse lõppstaadium, mida iseloomustab immuunsüsteemi tõsine allasurumine, aga ka kaasuvad haigused, entsefalopaatia või onkoloogilised haigused.

Vaatamata sellele, et HIV-nakkus on ravimatu, on tänapäeval olemas väga aktiivne retroviirusevastane ravi (ART), mis võib oluliselt pikendada HIV-nakkusega inimese eluiga ja parandada selle kvaliteeti.

Sellel testil on eriti kõrge diagnostiline väärtus, kui HIV-nakkus tekkis vahetult enne testimise aega (2-4 nädalat).

Milleks uuringuid kasutatakse?

Analüüsi kasutatakse selleks varajane diagnoosimine HIV, mis aitab vältida viiruse edasist edasikandumist teistele inimestele, samuti õigeaegselt alustada retroviirusevastast ravi ja HIV-nakkuse progresseerumist soodustavate haiguste ravi.

Millal on uuring planeeritud?

Ebaselge etioloogiaga püsivate sümptomitega (2-3 nädalat): subfebriili temperatuur, kõhulahtisus, öine higistamine, järsk kaalulangus, tõus lümfisõlmed.
Korduva herpesinfektsiooni, viirushepatiidi, kopsupõletiku, tuberkuloosi, toksoplasmoosiga.
Kui patsient põeb sugulisel teel levivaid haigusi (süüfilis, klamüüdia, gonorröa, genitaalherpes, bakteriaalne vaginoos).
Kui patsient on olnud kaitsmata vaginaalses, anaalses või oraalseksis mitme seksuaalpartneriga, uue partneriga või partneriga, kelle HIV-staatuses patsient pole kindel.
Kui patsiendile tehti vereülekande protseduur (kuigi sellisel viisil nakatumise juhud on praktiliselt välistatud, kuna verd kontrollitakse hoolikalt viirusosakeste olemasolu suhtes ja see läbib spetsiaalse kuumtöötluse).
Kui patsient on süstinud ravimeid mittesteriilsete instrumentidega.
Raseduse/raseduse planeerimise ajal (AZT raseduse ajal, keisrilõige, et vältida viiruse ülekandumist lapsele sünnikanalist läbimise ajal ja rinnaga toitmata jätmine, vähendavad HIV-i emalt lapsele edasikandumise riski 30% võrra kuni 1%).
Juhuslik süstimine nakatunud verd sisaldava süstla või muu esemega (nt meditsiiniline instrument) (sellistel juhtudel on nakatumise tõenäosus äärmiselt väike).

HIV-nakkus liigitatakse kontrollimatuks haiguseks selle spetsiifiliste ennetusmeetodite puudumise ja ravi ebapiisava efektiivsuse tõttu. Seetõttu kasutatakse HIV-nakkuse epidemioloogilise olukorra kontrolli all hoidmiseks praegu peamiselt sõeluuringuid. HIV-nakkuse diagnoosimise meetodite seas on juhtiv koht ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsil (ELISA), mis võimaldab uuritavatel isikutel tuvastada selle haiguse põhjustaja seroloogilisi markereid.

Selles aruandes esitatakse HIV-vastaste antikehade määramise tulemused 40 823 inimese vereseerumis, sealhulgas patsiendid. sünnituseelsed kliinikud, polikliinikud, linnahaiglad, samuti riskipatsientide (narkomaanid, viirusliku B-, C-hepatiidi ja sugulisel teel levivate haigustega haiged) uurimisele ja ravile spetsialiseerunud meditsiinikeskused. Uuringud viidi läbi 2005. aastal nimelises Sünnitusabi ja Günekoloogia Uurimisinstituudi immunoloogia laboris. ENNE. Ott Venemaa Meditsiiniteaduste Akadeemiast, kellel on ELISA meetodite kasutamise kogemus erinevate nakkushaiguste diagnoosimisel üle 15 aasta.

Vereseerumi proovide esmaseks uurimiseks kasutati CombiBest anti-HIV-1 + 2 testsüsteemi (ZAO Vector-Best, Novosibirsk), mis tuvastab kogu HIV-1 ja HIV-1 spetsiifilised antikehad uuritud inimese proovides. seerum või vereplasma 2 (immunoglobuliinide klassid A, G ja M). Selles diagnostikakomplektis kasutatakse rekombinantseid HIV-valke nii immobiliseerimiseks tablettide süvendites kui ka konjugaadina mädarõika peroksüdaasiga. Seerumi analüüsi tulemusi hinnati vastavalt testimissüsteemi juhistele: negatiivsed (ei sisaldanud HIV-1 ja HIV-2 antikehi) loeti testitavateks proovideks, mille optiline tihedus (OD) ELISA analüüsis ei ületanud ODcrit väärtus.

Laboris läbivaatamisel leiti, et 40 823 seerumiproovist 40 222 (98,5%) olid ELISA suhtes negatiivsed ja 601 (1,5%) testitud proovist peeti algselt positiivseks. Iga 601 seerumi kordusanalüüsi tulemusena järgmisel päeval kahes korduses (tableti kaks süvend) tuvastati 440 (73,2%) proovi positiivsena ja 161 (26,8%) negatiivsena. Vastavalt Tervise- ja Sotsiaalarengu Ministeeriumi soovitustele külmutati 440 skriiningpositiivset seerumit, mis viidi täiendavateks kinnitavateks uuringuteks haigla nr. S.P. Botkina. Need uuringud viidi läbi ELISA testsüsteemidega „ECOlab-Vironostics HIV 1.2 Ag/Ab“ („ECOlab“, Elektrogorsk), „Genscreen Plus“ HIV Ag-Ab” (BioRad, USA), samuti immunoblotkomplektid. Kinnitustestide 440 seerumi analüüsi tulemused viisid järeldusele, et 323 (73,4%) proovi on positiivsed ja 102 (23,2%) on negatiivsed. 15 uuritud proovi kohta (3,4%) saadi ebamäärane analüüsitulemus.

Tuleb märkida, et nendest 323 positiivsest seerumist 314 (97,2%) OD väärtused, mis saadi meie laboris nende esmase testimise käigus, kasutades CombiBest anti-HIV-1+2 testisüsteemi, jäid vahemikku 0,900 kuni 1,780 ja 9 puhul. (2,8%) proovid - 0,500-0,900. OD väärtused, mis saadi 52 proovi (51%) 102 negatiivse seerumi skriinimisel, jäid vahemikku 0,195 kuni 0,400; 40 (39,2%) proovi puhul - 0,401–0,800; 10 (9,8%) proovi - üle 0,800.

Nii selgus tehtud töö tulemusena, et vereseerumi esmane uuring HIV-nakkuse seroloogiliste markerite olemasolu tuvastamiseks, kasutades CombiBest anti-HIV-1+2 testsüsteemi, on kõrge efektiivsusega. Positiivseid sõeluuringu tulemusi kinnitasid täiendavad uuringud referentlaboris 73% juhtudest ja valepositiivseid tulemusi registreeriti ainult 0,25% 40 823 analüüsitud seerumist.

Kirjeldus

Ettevalmistus

Näidustused

Tulemuste tõlgendamine

Kirjeldus

Määramise meetod Ensüüm-immunoanalüüs (ELISA).

Uuritav materjal Seerum

Võimalik kodukülastus

HIV 1. ja 2. tüüpi antikehade ja HIV p24 antigeeni kombineeritud tuvastamine, kvalitatiivne test.

Tähelepanu. Positiivsete ja kahtlaste reaktsioonide korral võib tulemuse väljastamise tähtaega pikendada kuni 10 tööpäevani. HIV (inimese immuunpuudulikkuse viirus), mis põhjustab AIDS-i (omandatud immuunpuudulikkuse sündroom), kuulub retroviiruste perekonda. See kandub inimeselt inimesele läbi saastunud nõelte ja süstalde kasutamise intravenoosseks uimastitarbimiseks või terapeutilisteks protseduurideks, seksuaalvahekorras, nii hetero- kui ka homoseksuaalselt. Viiruse edasikandumine võib toimuda nakatunud vere ja selle saaduste ülekandel, elundite või seemnevedeliku annetamisel, tervishoiutöötajatel – nakatunud nõelte või instrumentidega vigastamise korral. HIV-nakkus on võimalik nakatunud emalt lapsele ülekandumise kaudu (vertikaalne tee), kuigi kaasaegsed retroviirusevastase ravi ennetusmeetodid, kui järgitakse kõiki soovitusi, võivad selle riski vähendada miinimumini.

Viiruse ja raku interaktsiooni protsess hõlmab mitmeid etappe: viiruse seondumine rakuga, selle vabanemine kestast, tungimine tsütoplasmasse, DNA süntees viiruse RNA-st ja viiruse DNA integreerimine raku genoomi. peremeesrakk. Pärast seda algab nakkuse varjatud staadium. Selles olekus võib proviiruse DNA eksisteerida mõnda aega ilma aktiivsust näitamata ja peremeesraku elutähtsat aktiivsust mõjutamata. Kuni viirusvalkude ekspressioon puudub, puudub ka immuunvastus viirusele. HIV-vastased antikehad, mis iseloomustavad organismi immuunvastust, tekivad pärast viiruse DNA aktiveerumist ja viiruse aktiivse paljunemise algust. Varjatud perioodi kestus sõltub paljudest teguritest, sealhulgas organismi individuaalsetest geneetilistest omadustest.

HIV-vastased antikehad võivad ilmneda alates teisest nädalast pärast nakatumist; nende sisaldus suureneb 2-4 nädala jooksul ja püsib palju aastaid. 90-95% nakatunutest ilmnevad need esimese kolme kuu jooksul pärast nakatumist, 5-9% -l - ajavahemikul kolm kuni kuus kuud ja 0,5-1% - hiljem.

Nakatumise esimestel nädalatel, isegi enne viirusevastaste antikehade ilmnemist (st enne serokonversiooni), võib seerumi- või plasmaproovides tuvastada HIV-antigeenide, sealhulgas selle p24 kapsiidivalgu olemasolu. Hiljem, pärast serokonversiooni, muutub see tavaliselt tuvastamatuks.

Neljanda põlvkonna kombineeritud testid, nagu HIV Ag/Ab Combo test (Architect, Abbott), tuvastavad nii HIV 1. ja 2. tüüpi antikehi kui ka HIV p24 antigeeni, võimaldades infektsiooni varakult tuvastada. INVITRO laboris HIV-nakkuse tuvastamiseks kasutatava skriiningtesti eripärade hulka kuulub uuringu kõrge spetsiifilisus (> 99,5%); Testi 100% tundlikkus serokonversiooni perioodile iseloomulike antikehade suhtes ja testi tundlikkus p24 antigeeni suhtes on umbes 18 pg/ml.

HIV-i laboratoorsete analüüside protseduur on rangelt reguleeritud Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi korraldustega ja see hõlmab HIV-vastaste antikehade olemasolu skriiningu (sõeluuringu) etappi kasutamiseks heakskiidetud ensüümi immuunanalüüsi (ELISA) meetoditega. , ja kontrolli (kinnitava) täpsema uuringu etapp linna AIDSi keskuse laboris. Tuleb märkida, et isegi parimad skriining-ELISA süsteemid ei taga 100% spetsiifilisust, see tähendab, et on teatud võimalus saada mittespetsiifilisi, valepositiivseid tulemusi, mis on seotud patsiendi vereseerumi omadustega. Seetõttu ei pruugi positiivset skriining-ELISA tulemust kinnitada kinnitavates testides, misjärel antakse patsiendile negatiivne või ebamäärane tulemus. Kui kinnitava uuringu tulemus on ebamäärane, tuleks testimist korrata dünaamikas 2-3 nädala pärast.

HIV-nakkuse laboratoorsel diagnoosimisel HIV-nakkusega emadelt sündinud lastel on oma eripärad. Ema HIV-vastased antikehad (IgG klass) võivad nende veres ringelda kuni 18 kuud alates sünnihetkest. HIV-vastaste antikehade puudumine vastsündinutel ei tähenda, et viirus poleks platsentaarbarjääri läbinud. HIV-nakkusega emade lastele tehakse laboratoorsed diagnostilised uuringud 36 kuu jooksul pärast sündi.

Ettevalmistus

Erilist ettevalmistust pole vaja. Vereproove soovitatakse võtta mitte varem kui 4 tundi pärast viimast söögikorda. Üldised soovitused uuringuteks valmistumiseks leiate. HIV-antigeeni ja -antikehade tuvastamise test on soovitatav läbi viia mitte varem kui kaks nädalat pärast võimalikku nakatumist, negatiivse tulemuse korral korrata seda kolme ja kuue nädala pärast. Uurimistaotluste registreerimine OÜ-s INVITRO toimub passi või seda asendava dokumendi (migratsioonikaart, ajutine registreerimine elukohas, sõjaväelase tõend, passiameti tõend passi kaotamise korral, registreerimiskaart) alusel. hotellist). Esitatav dokument peab sisaldama teavet ajutise või alalise registreerimise kohta Vene Föderatsiooni territooriumil ja fotot. Passi (seda asendava dokumendi) puudumisel on patsiendil õigus teha anonüümne avaldus biomaterjali kohaletoimetamiseks. Anonüümse läbivaatusega määratakse taotlusele ja kliendilt saadud biomaterjali proovile number, mis on teada ainult patsiendile ja tellimuse esitanud meditsiinipersonalile. ! Anonüümselt läbiviidud uuringute tulemusi ei saa esitada haiglaravile, kutseeksamile ning need ei kuulu ORUIB-s registreerimisele.

Näidustused kohtumiseks

Lümfisõlmede suurenemine rohkem kui kahes piirkonnas.
Leukopeenia koos lümfopeeniaga.
Öine higistamine.
Teadmata põhjusega järsk kaalulangus.
Kõhulahtisus rohkem kui kolm nädalat teadmata põhjusega.
Teadmata põhjusega palavik.
Raseduse planeerimine.
Preoperatiivne ettevalmistus, haiglaravi.
Järgmiste infektsioonide või nende kombinatsioonide tuvastamine: tuberkuloos, ilmne toksoplasmoos, sageli korduv herpesviiruse infektsioon, kandidoos siseorganid, korduv neuralgia vöötohatis, mis on põhjustatud mükoplasmadest, pneumotsüstiidist või legionella kopsupõletikust.
Kaposi sarkoom noores eas.
Juhuslik seks.

Tulemuste tõlgendamine

Testitulemuste tõlgendus sisaldab teavet raviarsti jaoks ega ole diagnoos. Selles jaotises olevat teavet ei tohiks kasutada enesediagnostikaks ega eneseraviks. Täpse diagnoosi paneb arst, kasutades nii selle uuringu tulemusi kui ka vajalikku teavet muudest allikatest: ajalugu, teiste uuringute tulemused jne.

Mõõtühikud sõltumatus laboris INVITRO: kvalitatiivne test. Tulemuste esitamise vorm: HIV 1 ja 2 ning p24 antigeeni vastaste antikehade puudumisel on vastus "negatiivne". HIV-vastaste antikehade või antigeeni tuvastamisel skriining-ELISA testis saadetakse seerumiproov kinnitava immunoblot-meetodil analüüsimiseks linna AIDS-i keskusesse, mis kontrollib positiivseid ja ebamääraseid tulemusi.

Positiivne tulemus:

HIV-nakkus;
valepositiivne tulemus, mis nõuab korduvaid või täiendavaid uuringuid*);
uuring ei ole informatiivne alla 18 kuu vanustel lastel, kes on sündinud HIV-nakkusega emadel.

*Sõeluuringusüsteemi HIV 1 ja 2 antikehade ning HIV 1 ja 2 antigeeni (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) spetsiifilisus on reaktiivi tootja hinnangul umbes 99,6% nii üldpopulatsioonis kui ka haigete rühmas. võimalikud häired (HBV, HCV, punetised, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. jne infektsioonid, autoimmuunpatoloogiad (sh. reumatoidartriit, tuumavastaste antikehade olemasolu), rasedus, kõrgendatud tase IgG, IgM, monoklonaalne gammopaatia, hemodialüüs, mitu vereülekannet).

Patendi RU 2283497 omanikud:

Leiutis käsitleb biotehnoloogia ja meditsiini valdkonda. Ensüüm-immuunanalüüsi testimissüsteem inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) esimest ja teist tüüpi, esimest tüüpi O rühma antikehade spektri tuvastamiseks ja inimese immuunpuudulikkuse viiruse esimese tüübi p24 antigeeni tuvastamiseks sisaldab immunosorbendipõhist süsteemi inimese immuunpuudulikkuse viiruse antigeenidel, mis esindavad gp41 (env HIV-1 ja HIV-2 rühm O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), HIV antigeeni 1 p24 vastaseid antikehi , ja tuvastamisreagendid, samas kui ülaltoodud HIV-antigeenid ja HIV-antikehad sorbeeritakse plaatide erinevatesse süvenditesse ensüümi immuunanalüüsi jaoks ning sorptsiooniks kasutatakse 96-süvendiga kokkupandavaid või mittekokkupandavaid polüstüreenplaate. Leiutis tagab tulemuste hindamise tundlikkuse suurendamise, lihtsustamise ja subjektiivsuse välistamise. 1 z.p. f-ly, 10 tab., 1 ill.

Leiutis käsitleb biotehnoloogia ja meditsiini valdkonda. Kasutamine: inimese immuunpuudulikkuse viiruse 1 ja 2, HIV 1 rühma O ja HIV 1 p24 antigeeni valkude kõigi klasside spetsiifiliste antikehade diferentseeritud tuvastamine.

Põhiolemus: ensüümi immuunanalüüsi testimissüsteemi saamine kõigi klasside antikehade spektri tuvastamiseks üksikute valkude ja HIV 1 ja 2, HIV 1 rühma O ja HIV 1 p24 antigeenide suhtes vereseerumis (plasmas), immunoglobuliinides ja veretoodetes, et tuvastada. HIV 1 ja 2 antikehade spekter, HIV 1 rühm O, HIV 1 p24 antigeeni tuvastamine ning HIV 1 ja 2, HIV 1 rühma O ja HIV 1 p24 antigeenide antikehade positiivsete või ebamääraste sõeluuringute tulemuste kinnitamine.

LEIUTISE KIRJELDUS

HIV-nakkuse laboratoorne diagnostika põhineb kolmel valdkonnal: a) HIV ja selle komponentide indikatsioon; b) HIV-vastaste antikehade tuvastamine; c) immuunsüsteemi muutuste määramine. Olemasolevate laboridiagnostika meetodite hulgas on kõige levinumad seroloogilised meetodid - viiruse antigeenide antikehade tuvastamine.

HIV-nakkuse antikehade tuvastamiseks kasutatakse peamiselt ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) ja immunoblotanalüüsi (IB). ELISA põhineb viiruse antigeenide immobiliseerimisel plaatidel, mis seovad patsiendi antikehi ning antigeeni-antikeha kompleksi tuvastamiseks kasutatakse mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud hiire monoklonaalseid antikehi inimese immunoglobuliinide G ja M vastu. Meetod on üsna spetsiifiline ja tundlik ning võimaldab tuvastada viirusspetsiifilisi antikehi 95% patsientidest. Ülejäänud 5% juhtudest esinevad infektsiooni varases staadiumis, kui vereseerumis on veel vähe antikehi, või haiguse lõppfaasis, kui organism ei suuda enam antikehi sünteesida järsu vereseerumis ammendumise tõttu. immuunsüsteem. Võimalikud on ka valepositiivsed ELISA tulemused, peamiselt autoimmuun- ja onkoloogiliste haigustega patsientidel, samuti Eshptein-Barri viiruse põhjustatud infektsioonide korral. Sel juhul tekib reumatoidfaktori vastaste antikehade ristreaktsioon, Epstein-Barri viirus või antigeensete determinantidega, mis on sarnased peamiste histo-sobivuse kompleksi 1. ja 2. klassi valkudega (HLA-4 ja DQW3) ja millel on võime seonduda HIV antigeenidega. Rasedatel ja eakatel on sageli näha valepositiivseid tulemusi. Ebausaldusväärsete tulemuste põhjuseks võivad olla ka hemolüüs, lipeemia, seerumite bakteriaalne saastumine.

Sellega seoses on antikehade tuvastamise tulemuste spetsiifilisuse testimiseks välja pakutud ja kasutatud mitmeid meetodeid. Nendest meetoditest on kõige sagedamini kasutatav reaktsioon "immuunblot" modifikatsioonis "Western Blot". Meetodi olemus on järgmine: esimeses etapis eraldatakse HIV-valgud molekulmassi järgi polüakrüülamiidgeelelektroforeesi abil. Sellele järgneb elektroforeetiline ülekanne polüakrüülamiidgeelilt nitrotselluloosmembraani pinnale. Sel viisil ülekantud antigeenid tuvastatakse membraanil kaudse analüüsi abil: membraani inkubeeritakse uuritava materjaliga; sisalduvad antikehad seonduvad HIV-antigeenidega, mis on kantud nitrotselluloosmembraanile, seejärel inkubeeritakse membraaniribasid konjugaadiga; kui moodustub antigeen-antikeha kompleks, kinnitub konjugaat sellele, pärast konjugaadist pesemist ja substraadiga inkubeerimist toimub nende nitrotselluloosi lõikude värvumine, kus toimub antigeen-antikeha-konjugaadi kompleksi moodustumine. Joonisel on näiteid positiivsete, nõrgalt positiivsete ja negatiivsete immunobloti tulemuste kohta.

HIV-1 ja HIV-2-ga nakatunud inimeste seerumis leitakse antikehad järgmiste valkude (p) ja glükoproteiinide (gp) vastu: Tabel A.

Tabelis B on toodud WHO ja Venemaa AIDSi ennetamise ja tõrje keskuse soovitatud immuunblotanalüüsi tulemuste hindamise kriteeriumid.

WHO kriteeriumide alusel loetakse seerumid positiivseks, kui IB-meetodil tuvastatakse antikehad mis tahes kahe HIV-1 ümbrise valgu vastu. Kui toimub reaktsioon ainult ühe ümbrisvalguga (gp160, gp120, gp41), kombinatsioonis reaktsiooniga teiste valkudega või ilma selleta, peetakse tulemust kaheldavaks. Venemaa Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi AIDSi ennetamise ja tõrje föderaalse teadus- ja metoodikakeskuse andmetel on seerumeid võimalik positiivseks tõlgendada isegi ainult ühe kattevalgu vastaste antikehade olemasolul.

Antigeeni p24 vastaste antikehade tuvastamine võib näidata serokonversiooni alguse perioodi, kuna selle valgu vastased antikehad ilmuvad esimesena. Positiivsed reaktsioonid gag- ja pol-valkudega ilma reaktsioonita env-valkudega võivad kajastada varase serokonversiooni staadiumit, samuti viidata HIV-2 nakkuse või mittespetsiifilise reaktsiooni olemasolule.

Immunoblotanalüüsi kasutamisel HIV diagnoosimise ekspertmeetodina on mitmeid olulisi puudusi:

1. HIV 1 antigeeni p24 tuvastamise kinnitamise võimatus HIV-antigeeni ja antikehi samaaegselt määravate testide kasutamise korral, mistõttu on ebasobiv (mõttetu) sõeltestide kasutamine antigeeni ja antikehade samaaegseks tuvastamiseks HIV-ile (Vene Föderatsiooni Tervishoiuministeeriumi korraldus nr 292 30.07.2001: "vereülekandejaamades doonorite uurimiseks on vaja kasutada testisüsteeme, mis tuvastavad nii antigeeni kui ka HIV-vastaseid antikehi").

2. Ainult IgG klassi antikehade tuvastamine. 3. ja 4. põlvkonna testidega (IgG ja IgM antikehade tuvastamine) saadud positiivseid tulemusi on võimatu täielikult kinnitada.

3. Testitulemuse tõlgendamise subjektiivsus, eriti "kahtlaste" ja "määramatute" tulemuste korral ning esialgsed etapid serokonversioon (nendel juhtudel on tuvastatavad ribad nitrotselluloosmembraanidel hägused, palja silmaga vaevu nähtavad ja erinevate isikute hinnangul esineb sageli lahkarvamusi).

4. Analüüsi tulemuste automatiseeritud kvantitatiivse hindamise võimatus.

5. Madalam tundlikkus võrreldes ELISA-ga.

6. Säilitamise haprus (säilitamise ajal tuhmuvad nitrotselluloosmembraani ribad ega saa olla objektiivseks kinnituseks HIV avastamisele või mitteavastamisele vastuolulistel juhtudel).

7. Raskused reaktsiooni seadistamisel ja säilitamisel (nitrotselluloosmembraani ribad on väga haprad ja sageli purunevad).

8. IS-komplektide kõrge hind.

Tuntud reaktiiv, mis on komplekt sama patogeeni, sealhulgas HIV, antigeenide ja antikehade samaaegseks määramiseks (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Samas ei avalikustata testisüsteemi, mis võimaldaks diagnoosida HIV-nakkust erinevates etappides.

Käesoleva leiutise eesmärgiks on saada testimissüsteem, mille abil on võimalik kinnitada HIV 1 ja 2, HIV 1 rühma O ja HIV 1 p24 antikehade sõeltestide positiivseid või kahtlasi tulemusi, kasutades teste samaaegseks antigeenid ja antikehad.

Kavandatav tehniline lahendus saavutatakse ensüümi immuunanalüüsi testimissüsteemiga inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) esimest ja teist tüüpi antikehade spektri tuvastamiseks, O rühma esimese tüübi ja inimese immuunpuudulikkuse viiruse antigeeni p24 tuvastamiseks. esimest tüüpi p24, mida iseloomustab see, et see sisaldab immunosorbenti, mis põhineb inimese immuunpuudulikkuse viiruse antigeenidel, milleks on gp41 (env HIV-1 ja HIV-2 rühm O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), HIV-antigeeni 1 p24 vastased antikehad ja tuvastamisreagendid, kusjuures ülaltoodud HIV-antigeenid ja HIV-antikehad adsorbeeritakse ensüümi immuunanalüüsi jaoks plaatide erinevatesse süvenditesse.

Lisaks kasutatakse sorptsiooniks 96 süvendiga polüstüreenist kokkupandavaid või mittekokkupandavaid plaate ensüümi immuunanalüüsi jaoks.

Käesoleva leiutisega saavutatud tehniline tulemus on HIV 1 ja 2, HIV 1 rühma O ja HIV 1 p24 antigeenide antikehade positiivsete tulemuste kinnitamise võimalus, kõrge tundlikkus, tulemuste automatiseeritud tõlgendamise võimalus, mis välistab hindamine, testi sooritamise lihtsus, väiksem kui olemasolevate kuludega IS komplektidega.

See tehniline lahendus erineb teadaolevatest:

1. Kasutage immunoloogiliste reaktsioonide jaoks tahke faasi kandeplaadina.

2. p 24 HIV antikehade ja HIV antigeenide komplekti samaaegne kasutamine sorbendina.

Leiutist illustreerib järgmine näide.

Väljatöötatud testimissüsteemi "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" toimeained on:

Immunosorbent – HIV-1 struktuurvalkudele sarnased rekombinantsed antigeenid: gp41 (env HIV-1 ja HIV 1 rühm O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) ja monoklonaalne hiire antikehad HIV 1 (p24) antigeeni vastu, mis on adsorbeeritud eraldi polüstüreenist kokkupandava plaadi ribadele.

Immunosorbentide valmistamiseks:

1. HIV-1 gp41 on valk, mida toodab E. Coli tüvi nr AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 on valk, mida toodab E. Coli tüvi nr AHIV 109.

3. HIV-1 p24 – E. Coli tüve nr AHIV 105 poolt toodetud valk.

4. HIV-1 p31 - valk, mida toodab E. Coli tüvi nr AHIV 108.

5. HIV-2 p36 – E. Coli tüve nr AHIV 106 poolt toodetud valk.

Konjugaat 1, lüofiliseeritud või vedel, hiire monoklonaalsed antikehad HIV1 p24 antigeeni vastu, konjugeeritud biotiiniga.

1. Konjugaat 2, lüofiliseeritud või vedel, rekombinantsete antigeenide segu, mis sarnaneb HIV-1 struktuurvalkudele: gp41 (env HIV-1 ja HIV 1 rühm O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1 ); HIV-2: biotiiniga konjugeeritud gp36 (env);

2. Konjugaadid 3, 4 - lüofiliseeritud või vedel - mädarõika peroksüdaasiga märgistatud streptavidiin;

Eeluuringute käigus valiti testsüsteemi disain, töötati välja selle komponentide valmistamise tehnoloogia ning optimeeriti ensüümi immuunanalüüsi läbiviimise tingimused.

ELISA seadistamisel testsüsteemis "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1" lisatakse plaadi süvenditesse p24 adsorbeeritud antikehadega 25 μl konjugaati-1 ja adsorbeeritud antigeenidega süvendid - 25 µl konjugaati-2. Reaktsiooniskeem on näidatud allpool. Järgmisena lisatakse igasse süvendisse 25 μl uuritavat proovi. Samal ajal muutub antigeenidega süvendite värvus oranžist roosaks ja antikehadega süvendis rohelisest halliks. Segu inkubeeritakse 45 minutit 37 °C juures loksutil (või 1 tund temperatuuril 37 °C termostaadis). Seejärel lisatakse ilma pesemata tableti süvenditesse 50 μl konjugaati-3 antigeeni p24 määramiseks ja 50 μl konjugaati-4 antikehade määramiseks. Pärast 20-minutilist inkubeerimist 37 °C juures loksutil (või 30-minutilist 37 °C juures termostaadis) plaati pestakse ja arendatakse substraadiseguga. Reaktsiooni koguaeg 1 tund 25 minutit (või 1 tund 50 minutit). Uuritavas proovis sisalduv p24 antigeen seondub p24 vastaste monoklonaalsete antikehadega ja spetsiifilised antikehad moodustavad plaadil rekombinantsete antigeenidega kompleksi. Saadud immuunkompleks anti-p24 p24-ga tuvastatakse anti-p24-biotiini konjugaatidega, seejärel streptavidiin-peroksidaasiga ja Ag-HIV immuunkompleksid At-HIV-ga tuvastatakse Ag-biotiini konjugaadiga, seejärel streptavidiin-peroksidaasiga. .

Reaktsiooni seadistamise skeem.

Tulemusi arvestatakse spektrofotomeetriliselt kahel lainepikkusel: 450/620-680 nm, seade on seatud "õhk". Arvestagem tulemusi ühel lainepikkusel 450 nm.

Analüüsi tulemusi võetakse arvesse, kui optilise tiheduse (OD) keskmised väärtused K-ga kaevudes ei ole suuremad kui 0,2, K+-ga kaevudes - mitte vähem kui 1,0. OP kriitik. arvutatakse valemiga:

OP kriitik. gp41 = vrd. väärtus OP K-(gp41)+0,15

OP kriitik. gp120 = vrd. väärtus OP K-(gp120)+0,15

OP kriitik. p24 = vt. väärtus OP K-(р24)+0,15

OP kriitik. p31 = vrd. väärtus OP K-(31)+0,15

OP kriitik. gp36 = vrd. väärtus OP K-(gp36)+0,15

OP kriitik. Ag p24 = vrd. väärtus OD kuni- (Ag p24)+0,04

kus 0,15 ja 0,04 on tootja juures statistilise töötlemise meetodil kehtestatud koefitsiendid. Testisüsteemi väljatöötamise käigus kasutati järgmist:

1. Tervete doonorite vereseerumi proovid (n=610).

2. Vere seerumi proovid patsientidelt, kellel on erinevad nakkushaigused ei ole seotud HIV-ga (ARI, kopsupõletik, tonsilliit, herpeedilised ja tsütomegaloviiruse infektsioonid, süüfilis, klamüüdia, viiruslik hepatiit A, B ja C (n = 224)).

3. Erinevate mittenakkushaigustega - vigastused, kardiovaskulaarsüsteemi haigused, onkoloogia - patsientide vereseerumi proovid (n=35).

4. Rasedate naiste vereseerumi proovid (n=40).

5. Vere seerumi proovid, ELISA seropositiivsed ja immunoblotiga kinnitatud (n=428).

6. Seerumiproovid positiivse tulemusega, mis on saadud HIV 1,2 antikehade ja p24 antigeeni samaaegseks määramiseks ensüümi immuunanalüüsi testisüsteemides ning määramatu immunobloti tulemus (n=123).

7. Seerumite sisemine paneel, mis sisaldab ja ei sisalda HIV 1.2 antikehi, testitud Vene Föderatsiooni tervishoiuministeeriumi registreeritud ensüümi immuunanalüüside ja immunobloti abil (n=21).

8. Standard "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Prantsusmaa, kat. 72217, mis on viiruse lüsaadist saadud antigeen.

9. Ettevõtte sisestandard. Proov, mis sisaldab p 24 antigeeni kontsentratsioonis 200 pg/ml, mis on saadud viiruse lüsaadist ja tiitritud vastavalt "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" firmale "BIO RAD", Prantsusmaa, kat. nr 72217.

10. Standardne seerumite paneel, mis sisaldab inimese immuunpuudulikkuse viiruse esimest tüüpi (HIV 1) antikehi – OSO 42-28-212-93-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

11. Standardne seerumite paneel, mis sisaldab inimese immuunpuudulikkuse viiruse teist tüüpi (HIV 2) antikehi - OSO-42-28-216-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

12. Standardpaneel seerumitest, mis ei sisalda inimese immuunpuudulikkuse viiruse antikehi esimest ja teist tüüpi (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

P24 antigeeni tuvastamise testimissüsteemi tundlikkuse hindamine viidi läbi ettevõtte sisestandardi "HIV I ANTIGEEN STANDARD" ja "BIO RAD" abil. Sisestandardit kasutades valmistati 4 järjestikust 2-kordset lahjendust vahemikus 40 pg/ml kuni 5 pg/ml, kasutades lahjendina normaalset doonori plasmat, mis ei sisaldanud HIV 1, 2 vastaseid antikehi. Tundlikkuse kriteeriumiks võeti väikseim tuvastatava antigeeni kogus. Saadud andmed on toodud tabelis 1.

Spetsiifiliste antikehade tuvastamise testimissüsteemi tundlikkuse hindamiseks kasutati standardseid proovide paneele, mis sisaldasid inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV 1, 2) antikehi (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) p.003).

Saadud andmed on toodud tabelites 3, 4.

Testisüsteemi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" diagnostilist efektiivsust võrreldi testsüsteemidega "Jenscrin-HIV-Ag/Am" (Bio-Rad), "DIA-HIV". 1 /2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Sel eesmärgil testiti sisepaneelilt võetud seerumiproove kõigis näidatud testides. Tabelis 5 esitatud tulemused näitavad "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" kõrget diagnostilist efektiivsust.

Testsüsteemi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tundlikkuse uuringud viidi läbi ka patsientide vereseerumiga, mille immunoblotis kinnitati HIV-positiivne. Nendest seerumitest testiti kokku 428 proovi. Erinevate HIV valkude ja p24 antigeeni vastaste antikehade tuvastamiseks on saadud mitmeid võimalusi. Tulemused on toodud tabelis 6.

Tabel 6 Erinevate HIV 1 valkude ja p24 antigeeni antikehade tuvastamise tulemused HIV 1 positiivsete seerumite testimisel (n=428)
% märkamine	Valgu profiil
	anti-gr41	anti-gr120	anti-r24	anti-r31	lk 24
51,1%	+	+	+	+	-
35,3%	+	-	+	+	-
4%	+	-	+	-	-
3,3%	+	-	-	+	-
1,4%	+	-	-	+	+
1,2%	+	+	+	+	+
1,2%	+	+	-	+	+
0,9%	+	-	+	+	+
0,7%	+	-	+	-	+
0,5%	+	-	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	-
Üksikute valkude või Ag p24 vastaste antikehade tuvastamise %	100%	53,9%	93,2%	94,4%	6,1%

HIV 1 positiivsete proovide testimisel ilmnes 3% seerumitest positiivne reaktsioon gp36-ga (env HIV 2). MP/OPcrit nendes proovides ei ületanud 2,0. Meie andmed HIV 1 (gp41) ja HIV 2 (gp36) välisümbrise valkude ristreaktiivsuse kohta on kooskõlas kirjanduse andmetega.

Tulemuste tõlgendamine

"DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" HIV-positiivsete seerumite ning standard- ja sisepaneelide proovide testimise analüüs võimaldas välja töötada kriteeriumid selle testi tulemuste tõlgendamiseks. Soovitatavad kriteeriumid on toodud tabelis 7.

Nende kriteeriumide alusel tuvastati kõik HIV-positiivsed seerumiproovid (n=428) positiivsetena uuringus "DS-ELISA-HIV-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". HIV-vastaseid antikehi sisaldava standardpaneeli 16 proovist 1 määrati 14 positiivseks ja 2 määramatuks. Kõik 8 proovi standardpaneelist, mis sisaldasid HIV 2 antikehi, olid positiivsed. Sisepaneeli 10 proovist, mis sisaldasid HIV-vastaseid antikehi, 1 tuvastati 7 positiivsena ja 3 määramatuna.

Testsüsteemi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tundlikkuse uuringud viidi läbi ka patsientide vereseerumiga, mille tulemus oli positiivne ensüümi immuunanalüüsi testisüsteemides, mis tuvastavad samaaegselt antikehi ja p24 antigeeni, ja immunoblotis määramatu. Kokku testiti 123 sellist proovi. Andmed on toodud tabelis 8.

Määramata immunobloti tulemusega (n=123) seerumite testimisel uuringus "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" näitas 72 proovi (58,5%) positiivset tulemust. Neist 26 seerumit (21,1%) on positiivsed ainult p24 suhtes, 20 (16,3%) - ainult antikehade suhtes, 16 (13%) - p24 suhtes, millel on ühe valgu vastased antikehad, 10 (8,1%) - p24-l. antikehad kahe või enama valgu vastu. Seega ainuüksi antikehade testimine (p24 ei tuvastata) annaks positiivse tulemuse 30 proovi (24,4%). P24 antigeeni tuvastamine testis võimaldas määrata positiivseks veel 42 proovi (34,1%).

Katsesüsteemi spetsiifilisuse hindamiseks kasutati standardset seerumite paneeli, mis ei sisaldanud HIV 1, 2 antikehi (n=20); vereseerumi proovid tervetelt doonoritelt (n=610), vereseerumi proovid erinevatelt HIV-ga mitteseotud nakkushaigustega patsientidelt (n=224); erinevate mittenakkushaigustega patsientide vereseerumi proovid - vigastused, südame-veresoonkonna haigused, onkoloogia (n=35); rasedate naiste vereseerumi proovid (n=40). Kokku testiti 929 proovi. Tervete doonorite vereseerumite üks proov andis valepositiivse tulemuse – tuvastati gp41 ja p24 vastased antikehad. 7 tervete doonorite vereseerumi proovi ja 2 HIV-ga mitteseotud nakkushaigustega patsientide vereseerumi proovi andsid p24 valepositiivse tulemuse.

Katsesüsteemi spetsiifilisuse hindamiseks kasutati standardset negatiivsete proovide paneeli (OSO 42-28-214-94-02p, lk 009). Spetsiifilisus oli 100%.

Seega on läbiviidud uuringud näidanud, et normaalsete doonorite ja erinevate nakkushaigustega patsientide vereseerumi proovide uurimisel on testisüsteemi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" spetsiifilisus 99%. ja somaatilised haigused.

Saadud andmed näitavad väljatöötatud testimissüsteemi "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" kõrget diagnostilist efektiivsust. Testisüsteemi saab kasutada antikehade tuvastamiseks HIV 1. ja 2. tüüpi üksikute valkude ja HIV1 p24 antigeeni vastu, et kinnitada positiivne sõeluuringu tulemus antikehi tuvastavate testisüsteemidega või testsüsteemidega, mis tuvastavad samaaegselt antikehi ja HIV1 p24 antigeeni. Testisüsteemi saab kasutada alternatiivse immunoblot-testina positiivsete tulemuste kinnitamiseks, samuti HIV ja p24 antigeeni vastaste antikehade dünaamika uurimiseks. erinevad etapid infektsioonid.

TESTI EELISED

1. Kinnitav ensüümi immuunanalüüsi plaadi formaat

2. Kinnitav test, mis ühendab HIV 1, 2 antikehade spektri ja HIV 1 p24 antigeeni

3. Kõigi Ig klasside antikehade tuvastamine

4. Tundlikkus p24 tuvastamisel ei ole väiksem kui 5 pg/ml

5. Vähendab määramatuid tulemusi võrreldes immunoblotiga

6. Analüüsi aeg - 1 tund 25 minutit (immunoblot - 3 kuni 20 tundi)

7. Kõikide komponentide ja näidiste sisestamise visuaalne hindamine.

1. ELISA testisüsteem inimese immuunpuudulikkuse viiruse (HIV) esimest ja teist tüüpi antikehade spektri tuvastamiseks, O rühma esimest tüüpi ja inimese immuunpuudulikkuse viiruse esimest tüüpi p24 antigeeni p24 tuvastamiseks; mida iseloomustab see, et see sisaldab immunosorbenti, mis põhineb immuunpuudulikkuse viiruse antigeenidel gp41 (env HIV-1 ja HIV-2 rühm O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antikehadel HIV-antigeenile 1 p24 ja tuvastavad reaktiivid, samal ajal kui ülaltoodud HIV-antigeenid ja HIV-antikehad adsorbeeritakse ensüümi immuunanalüüsi jaoks plaatide erinevatesse süvenditesse.

2. ELISA testsüsteem vastavalt nõudluspunktile 1, mida iseloomustab see, et sorptsiooniks kasutatakse 96 süvendiga polüstüreenist kokkupandavaid või mittekokkupandavaid plaate ensüümi immuunanalüüsi jaoks.